中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
32期
6332-6337
,共6页
韩小改%李建斌%马建军%单泓%焦红亮%马会娟%吕康涛
韓小改%李建斌%馬建軍%單泓%焦紅亮%馬會娟%呂康濤
한소개%리건빈%마건군%단홍%초홍량%마회연%려강도
脑血管病%骨髓间充质干细胞%诱导%分化%神经元样细胞
腦血管病%骨髓間充質榦細胞%誘導%分化%神經元樣細胞
뇌혈관병%골수간충질간세포%유도%분화%신경원양세포
背景:近年发现,骨髓间充质干细胞可以向神经细胞分化,但其最佳诱导剂及诱导分化时间尚无公论.目的:寻求一种将成人骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞的最佳诱导剂及诱导时间.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-10/2008-08在郑州大学第二附属医院完成.材料:取郑州大学医学院第二附属医院血液科穿刺的健康成人骨髓,性别不限.方法:将细胞转至24孔培养板中培养,将诱导剂脑源性神经营养因子(brain-derived nemotrophic factor,BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-dedved neurotrophicfactor,GDNF)配成质量浓度为20 μg/L的溶液,维甲酸配成质量浓度为0.3 mg/L的溶液,用加样器加入含DMEM、体积分数为2.5%胎牛血清的细胞中,诱导剂的最终浓度为2.5 9/L,实验分为4组:GDNF+维甲酸组,BDNF+维甲酸组,GDNF+BDNF+维甲酸组,空白对照组(未加诱导剂).主要观察指标:分别于诱导后12,24,48,96 h后于倒置显微镜下观察各组细胞形状,并进行细胞计数,锥虫蓝检测细胞活力,并行免疫组织化学鉴定.结果:①诱导12 h后,GDNF+维甲酸组有16.28%的细胞出现分化,其他3组未发现分化细胞,行免疫组织化学检测显示4组细胞胞浆均显示蓝色为阴性表现,即未有神经元样细胞出现.②诱导24 h后,GDNF+维甲酸组有14.83%的细胞出现分化,BDNF+维甲酸组分化率为10.66%,GDNF+BDNF+维甲酸绀为4.53%,空白对照组未发现分化细胞.免疫组织化学检测4组均为阴性.⑨诱导48 h后,4组细胞分化率分别为(63.91±2.19)%,(23.15+3.00)%,(19.69+1.98)%,0,免疫组织化学检测结果GDNF+维甲酸组为阳性,即有神经元样细胞出现,其余3组均为阴性.④诱导96 h后,4组细胞分化率分别为(51.29+3.75)%,(25.13+2.88)%,(23.61±1.94)%,0,免疫组织化学检测均为阴性.结论:实验中骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞的最佳诱导剂为GDNF+维甲酸,最佳诱导时间为48 h.
揹景:近年髮現,骨髓間充質榦細胞可以嚮神經細胞分化,但其最佳誘導劑及誘導分化時間尚無公論.目的:尋求一種將成人骨髓間充質榦細胞誘導分化為神經元樣細胞的最佳誘導劑及誘導時間.設計、時間及地點:隨機分組設計,對比觀察,于2007-10/2008-08在鄭州大學第二附屬醫院完成.材料:取鄭州大學醫學院第二附屬醫院血液科穿刺的健康成人骨髓,性彆不限.方法:將細胞轉至24孔培養闆中培養,將誘導劑腦源性神經營養因子(brain-derived nemotrophic factor,BDNF)和膠質細胞源性神經營養因子(glial cell line-dedved neurotrophicfactor,GDNF)配成質量濃度為20 μg/L的溶液,維甲痠配成質量濃度為0.3 mg/L的溶液,用加樣器加入含DMEM、體積分數為2.5%胎牛血清的細胞中,誘導劑的最終濃度為2.5 9/L,實驗分為4組:GDNF+維甲痠組,BDNF+維甲痠組,GDNF+BDNF+維甲痠組,空白對照組(未加誘導劑).主要觀察指標:分彆于誘導後12,24,48,96 h後于倒置顯微鏡下觀察各組細胞形狀,併進行細胞計數,錐蟲藍檢測細胞活力,併行免疫組織化學鑒定.結果:①誘導12 h後,GDNF+維甲痠組有16.28%的細胞齣現分化,其他3組未髮現分化細胞,行免疫組織化學檢測顯示4組細胞胞漿均顯示藍色為陰性錶現,即未有神經元樣細胞齣現.②誘導24 h後,GDNF+維甲痠組有14.83%的細胞齣現分化,BDNF+維甲痠組分化率為10.66%,GDNF+BDNF+維甲痠紺為4.53%,空白對照組未髮現分化細胞.免疫組織化學檢測4組均為陰性.⑨誘導48 h後,4組細胞分化率分彆為(63.91±2.19)%,(23.15+3.00)%,(19.69+1.98)%,0,免疫組織化學檢測結果GDNF+維甲痠組為暘性,即有神經元樣細胞齣現,其餘3組均為陰性.④誘導96 h後,4組細胞分化率分彆為(51.29+3.75)%,(25.13+2.88)%,(23.61±1.94)%,0,免疫組織化學檢測均為陰性.結論:實驗中骨髓間充質榦細胞誘導分化為神經元樣細胞的最佳誘導劑為GDNF+維甲痠,最佳誘導時間為48 h.
배경:근년발현,골수간충질간세포가이향신경세포분화,단기최가유도제급유도분화시간상무공론.목적:심구일충장성인골수간충질간세포유도분화위신경원양세포적최가유도제급유도시간.설계、시간급지점:수궤분조설계,대비관찰,우2007-10/2008-08재정주대학제이부속의원완성.재료:취정주대학의학원제이부속의원혈액과천자적건강성인골수,성별불한.방법:장세포전지24공배양판중배양,장유도제뇌원성신경영양인자(brain-derived nemotrophic factor,BDNF)화효질세포원성신경영양인자(glial cell line-dedved neurotrophicfactor,GDNF)배성질량농도위20 μg/L적용액,유갑산배성질량농도위0.3 mg/L적용액,용가양기가입함DMEM、체적분수위2.5%태우혈청적세포중,유도제적최종농도위2.5 9/L,실험분위4조:GDNF+유갑산조,BDNF+유갑산조,GDNF+BDNF+유갑산조,공백대조조(미가유도제).주요관찰지표:분별우유도후12,24,48,96 h후우도치현미경하관찰각조세포형상,병진행세포계수,추충람검측세포활력,병행면역조직화학감정.결과:①유도12 h후,GDNF+유갑산조유16.28%적세포출현분화,기타3조미발현분화세포,행면역조직화학검측현시4조세포포장균현시람색위음성표현,즉미유신경원양세포출현.②유도24 h후,GDNF+유갑산조유14.83%적세포출현분화,BDNF+유갑산조분화솔위10.66%,GDNF+BDNF+유갑산감위4.53%,공백대조조미발현분화세포.면역조직화학검측4조균위음성.⑨유도48 h후,4조세포분화솔분별위(63.91±2.19)%,(23.15+3.00)%,(19.69+1.98)%,0,면역조직화학검측결과GDNF+유갑산조위양성,즉유신경원양세포출현,기여3조균위음성.④유도96 h후,4조세포분화솔분별위(51.29+3.75)%,(25.13+2.88)%,(23.61±1.94)%,0,면역조직화학검측균위음성.결론:실험중골수간충질간세포유도분화위신경원양세포적최가유도제위GDNF+유갑산,최가유도시간위48 h.
