CAJ | 학술논문

为构建刚地弓形虫微线体蛋白3(MIC3)原核表达体系,获得高纯度MIC3蛋白用于制备单克隆抗体,评价MIC3蛋白在临床诊断方面的应用价值,根据刚地弓形虫MIC3基因编码的已知序列设计引物,应用PCR技术从刚地弓形虫NT株的基因组DNA中扩增出去除信号肽的MIC3基因,将该基因克隆入pET-32a(+)表达载体,构建pET-32a(+)表达载体,并转化人大肠杆菌(Escherichia.coli)Trans 5α感受态细胞.扩增的MIC3基因与GenBank.中相应基因序列(AF509564.1)的同源性达99.9％.将阳性重组表达质粒转化人E.coli BL21-codon plus,经IPTG20℃低温诱导表达,SDS-PAGE分析结果显示,MIC3融合蛋白分子量约为56000.Western-blotting分析鉴定结果表明,MIC3融合蛋白可被猪抗弓形虫免疫血清所识别.获得的MIC3融合蛋白具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础.
위구건강지궁형충미선체단백3(MIC3)원핵표체체계,획득고순도MIC3단백용우제비단극륭항체,평개MIC3단백재림상진단방면적응용개치,근거강지궁형충MIC3기인편마적이지서렬설계인물,응용PCR기술종강지궁형충NT주적기인조DNA중확증출거제신호태적MIC3기인,장해기인극륭입pET-32a(+)표체재체,구건pET-32a(+)표체재체,병전화인대장간균(Escherichia.coli)Trans 5α감수태세포.확증적MIC3기인여GenBank.중상응기인서렬(AF509564.1)적동원성체99.9％.장양성중조표체질립전화인E.coli BL21-codon plus,경IPTG20℃저온유도표체,SDS-PAGE분석결과현시,MIC3융합단백분자량약위56000.Western-blotting분석감정결과표명,MIC3융합단백가피저항궁형충면역혈청소식별.획득적MIC3융합단백구유일정적반응원성,위하일보이용중조단백건립궁형충적진단방법화연제궁형충적아단위역묘전정료기출.