实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2007年
10期
740-742
,共3页
卜笑松%唐久来%吴德%许晓燕
蔔笑鬆%唐久來%吳德%許曉燕
복소송%당구래%오덕%허효연
人巨细胞病毒%pp65%基因疫苗%克隆%表达
人巨細胞病毒%pp65%基因疫苗%剋隆%錶達
인거세포병독%pp65%기인역묘%극륭%표체
目的 探讨人巨细胞病毒( HCMV)基因疫苗的研制及其预防和治疗HCMV原发和再发感染的效果.方法 应用聚合酶链式反应(PCR)扩增HCMV pp65基因全长、巨细胞病毒(CMV)启动子的上下游序列,转化至质粒并载体,测序;合成分泌肽基因,构建自制的含CMV启动子、pp65基因和分泌肽基因的pcDNA 5.0转染载体,即HCMV pp65基因疫苗.将该载体疫苗通过脂质转染法转至中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,Western点杂交检测CHO细胞上清中pp65蛋白.结果 克隆pp65基因全长测序结果与HCMV AD169株上的pp65标准序列比较:一致性为99.99%.构建了含有分泌肽、CMV启动子(含有增强子和内含子) 和pp65全长pcDNA 5.0的转染载体,即HCMV基因疫苗.转染至CHO 细胞,其上清培养提取物Western点杂交阳性.结论 含有分泌肽、CMV启动子和pp65cDNA的pcDNA 5.0真核载体即粗制的HCMV 基因疫苗可成功构建.
目的 探討人巨細胞病毒( HCMV)基因疫苗的研製及其預防和治療HCMV原髮和再髮感染的效果.方法 應用聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增HCMV pp65基因全長、巨細胞病毒(CMV)啟動子的上下遊序列,轉化至質粒併載體,測序;閤成分泌肽基因,構建自製的含CMV啟動子、pp65基因和分泌肽基因的pcDNA 5.0轉染載體,即HCMV pp65基因疫苗.將該載體疫苗通過脂質轉染法轉至中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,Western點雜交檢測CHO細胞上清中pp65蛋白.結果 剋隆pp65基因全長測序結果與HCMV AD169株上的pp65標準序列比較:一緻性為99.99%.構建瞭含有分泌肽、CMV啟動子(含有增彊子和內含子) 和pp65全長pcDNA 5.0的轉染載體,即HCMV基因疫苗.轉染至CHO 細胞,其上清培養提取物Western點雜交暘性.結論 含有分泌肽、CMV啟動子和pp65cDNA的pcDNA 5.0真覈載體即粗製的HCMV 基因疫苗可成功構建.
목적 탐토인거세포병독( HCMV)기인역묘적연제급기예방화치료HCMV원발화재발감염적효과.방법 응용취합매련식반응(PCR)확증HCMV pp65기인전장、거세포병독(CMV)계동자적상하유서렬,전화지질립병재체,측서;합성분비태기인,구건자제적함CMV계동자、pp65기인화분비태기인적pcDNA 5.0전염재체,즉HCMV pp65기인역묘.장해재체역묘통과지질전염법전지중국창서란소(CHO)세포,Western점잡교검측CHO세포상청중pp65단백.결과 극륭pp65기인전장측서결과여HCMV AD169주상적pp65표준서렬비교:일치성위99.99%.구건료함유분비태、CMV계동자(함유증강자화내함자) 화pp65전장pcDNA 5.0적전염재체,즉HCMV기인역묘.전염지CHO 세포,기상청배양제취물Western점잡교양성.결론 함유분비태、CMV계동자화pp65cDNA적pcDNA 5.0진핵재체즉조제적HCMV 기인역묘가성공구건.
