生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2002年
3期
420-423
,共4页
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a%高效表达%亲和层析%tPA突变体(NTA)
重組刺桐胰蛋白酶抑製劑a%高效錶達%親和層析%tPA突變體(NTA)
중조자동이단백매억제제a%고효표체%친화층석%tPA돌변체(NTA)
将基因工程菌株E.coli BL21(DE3) pET22b-mETIa高密度发酵,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli 中得到较高水平表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白.测得rETIa对t-PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki为8.72×10-8 mol/L.据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose 4B亲和层析柱.直接一步纯化NTA复性液,纯化的NTA纯度达90 %以上,收率为96.2 %,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3) U/μg.
將基因工程菌株E.coli BL21(DE3) pET22b-mETIa高密度髮酵,用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導,重組刺桐胰蛋白酶抑製劑a(rETIa)蛋白在E.coli 中得到較高水平錶達,錶達量佔菌體總蛋白的40%以上.經菌體破碎、包涵體變性、複性,二步柱層析純化得到電泳純的rETIa蛋白.測得rETIa對t-PA突變體(NTA)的抑製平衡常數Ki為8.72×10-8 mol/L.據此利用純化的rETIa蛋白製備rETIa-Sepharose 4B親和層析柱.直接一步純化NTA複性液,純化的NTA純度達90 %以上,收率為96.2 %,純化倍數為13.2,比活為(565.7±71.3) U/μg.
장기인공정균주E.coli BL21(DE3) pET22b-mETIa고밀도발효,용이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도,중조자동이단백매억제제a(rETIa)단백재E.coli 중득도교고수평표체,표체량점균체총단백적40%이상.경균체파쇄、포함체변성、복성,이보주층석순화득도전영순적rETIa단백.측득rETIa대t-PA돌변체(NTA)적억제평형상수Ki위8.72×10-8 mol/L.거차이용순화적rETIa단백제비rETIa-Sepharose 4B친화층석주.직접일보순화NTA복성액,순화적NTA순도체90 %이상,수솔위96.2 %,순화배수위13.2,비활위(565.7±71.3) U/μg.
