复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2005年
4期
419-422,426
,共5页
窦金民%郭莉莉%刘宏磊%陈接根%黄海燕%宋后燕%汤其群
竇金民%郭莉莉%劉宏磊%陳接根%黃海燕%宋後燕%湯其群
두금민%곽리리%류굉뢰%진접근%황해연%송후연%탕기군
人睫状神经营养因子%重组蛋白%表达与纯化%鸡胚背根神经节
人睫狀神經營養因子%重組蛋白%錶達與純化%鷄胚揹根神經節
인첩상신경영양인자%중조단백%표체여순화%계배배근신경절
目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性.方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中.将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达.细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTE重组蛋白.然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性.结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Westem印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性.表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白.该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活.结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白.
目的錶達和純化人睫狀神經營養因子(CNTF)併觀察其生物學活性.方法用PCR方法構建人CNTF的結構基因,併剋隆于pLy4原覈錶達載體中.將重組錶達質粒pLy4-CNTF轉化大腸埃希菌JF1125,30℃培養至A600(nm)達到0.6時,迅速升溫至42℃誘導目的蛋白的錶達.細菌經超聲破胞,包涵體經變性、複性、透析和陰離子交換層析,穫得純化的CNTE重組蛋白.然後,用鷄胚揹根神經節神經元細胞存活實驗觀察其生物活性.結果42℃誘導後可以穫得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Westem印跡結果進一步錶明,其具有人CNTF的抗原性.錶達蛋白主要以不溶形式存在,佔菌體蛋白的35%以上,錶達產物經變性、複性,純化後可穫得純度90%以上的目的蛋白.該重組蛋白能夠促進鷄胚揹根神經節神經元細胞的存活.結論在大腸埃希菌JF1125中成功錶達瞭人CNTF分子,經變性、複性,純化後得到具有生物活性的蛋白.
목적표체화순화인첩상신경영양인자(CNTF)병관찰기생물학활성.방법용PCR방법구건인CNTF적결구기인,병극륭우pLy4원핵표체재체중.장중조표체질립pLy4-CNTF전화대장애희균JF1125,30℃배양지A600(nm)체도0.6시,신속승온지42℃유도목적단백적표체.세균경초성파포,포함체경변성、복성、투석화음리자교환층석,획득순화적CNTE중조단백.연후,용계배배근신경절신경원세포존활실험관찰기생물활성.결과42℃유도후가이획득Mr≈22.9×103적목적단백,Westem인적결과진일보표명,기구유인CNTF적항원성.표체단백주요이불용형식존재,점균체단백적35%이상,표체산물경변성、복성,순화후가획득순도90%이상적목적단백.해중조단백능구촉진계배배근신경절신경원세포적존활.결론재대장애희균JF1125중성공표체료인CNTF분자,경변성、복성,순화후득도구유생물활성적단백.
