中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
12期
45-49
,共5页
张伍魁%范清林%邹文艺%仲皙%宋礼华
張伍魁%範清林%鄒文藝%仲皙%宋禮華
장오괴%범청림%추문예%중석%송례화
白蛋白融合α-2b干扰素%巴斯德毕赤酵母菌%Wish细胞-VSV病毒系统
白蛋白融閤α-2b榦擾素%巴斯德畢赤酵母菌%Wish細胞-VSV病毒繫統
백단백융합α-2b간우소%파사덕필적효모균%Wish세포-VSV병독계통
α-2b干扰素的重组表达质粒pPIC9K-HSA-IFNα-2b经限制性内切酶SalI酶切线性化后电转化巴斯德毕赤酵母菌(P.Pastoris)SMD1168,将阳性转化子进行PCR鉴定和Mut表型鉴定并用甲醇诱导表达,Western-Blot结果表明白蛋白融合IFNα蛋白与IFNα抗体具有结合能力,Wish细胞-VSV病毒系统鉴定表达蛋白具有抗病毒生物活性.在摇瓶培养条件下,甲醇在0.5%～4.0%的范围,随着浓度的升高蛋白表达量也升高,在其他因素固定时,菌体起始OD值在5～80的范围内,随着OD值的升高表达量反而下降.成功表达出具有高生物学活性的白蛋白融合干扰素蛋白(HSA-IFNα-2b),为进一步应用打下基础.
α-2b榦擾素的重組錶達質粒pPIC9K-HSA-IFNα-2b經限製性內切酶SalI酶切線性化後電轉化巴斯德畢赤酵母菌(P.Pastoris)SMD1168,將暘性轉化子進行PCR鑒定和Mut錶型鑒定併用甲醇誘導錶達,Western-Blot結果錶明白蛋白融閤IFNα蛋白與IFNα抗體具有結閤能力,Wish細胞-VSV病毒繫統鑒定錶達蛋白具有抗病毒生物活性.在搖瓶培養條件下,甲醇在0.5%～4.0%的範圍,隨著濃度的升高蛋白錶達量也升高,在其他因素固定時,菌體起始OD值在5～80的範圍內,隨著OD值的升高錶達量反而下降.成功錶達齣具有高生物學活性的白蛋白融閤榦擾素蛋白(HSA-IFNα-2b),為進一步應用打下基礎.
α-2b간우소적중조표체질립pPIC9K-HSA-IFNα-2b경한제성내절매SalI매절선성화후전전화파사덕필적효모균(P.Pastoris)SMD1168,장양성전화자진행PCR감정화Mut표형감정병용갑순유도표체,Western-Blot결과표명백단백융합IFNα단백여IFNα항체구유결합능력,Wish세포-VSV병독계통감정표체단백구유항병독생물활성.재요병배양조건하,갑순재0.5%～4.0%적범위,수착농도적승고단백표체량야승고,재기타인소고정시,균체기시OD치재5～80적범위내,수착OD치적승고표체량반이하강.성공표체출구유고생물학활성적백단백융합간우소단백(HSA-IFNα-2b),위진일보응용타하기출.
