CAJ | 학술논문

目的:克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3,观察他在真核细胞SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响.方法:利用TRIzol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N2/pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定.将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-772l细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色实验对转染细胞的生物学行为进行检测.结果:将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000 bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N2/pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N2/pim-3转染组凋亡细胞占3.5%,质粒pEGFP-N2转染组凋亡细胞占10.7%,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11.0%,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义(P＜0.05);倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-7721细胞中的正常表达;MTT比色实验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡.结论:真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡.
목적:극륭대서원암기인pim-3병구건진핵표체중조질립pEGFP-N2/pim-3,관찰타재진핵세포SMMC-7721중적표체정황이급대세포조망적영향.방법:이용TRIzol종액담보존적대서골격기조직중제취총RNA,채용RT-PCR방법획취pim-3 cDNA,병구건중조질립pEGFP-N2/pim-3,전화용CaCl2법제비적대장간균JM-109균주,매절이급측서감정.장중조질립통과지질체개도전염간암SMMC-772l세포후이용도치형광현미경관찰기인표체정황,병이용류식세포술급MTT비색실험대전염세포적생물학행위진행검측.결과:장RT-PCR산물전부용우저용점경지당응효전영、회수,재DL 2000 Marker 1000 bp부근가견청석조대,여실험설계부합;양성극륭질립적매절전영화측서결과표명,대서pim-3 cDNA적극륭화중조질립pEGFP-N2/pim-3적구건성공;중조질립pEGFP-N2/pim-3전염조조망세포점3.5%,질립pEGFP-N2전염조조망세포점10.7%,이부가입전염액적공백조조망세포점11.0%,중조질립전염조여량대조조지간차이유통계학의의(P＜0.05);도치형광현미경가이관찰도pim-3재SMMC-7721세포중적정상표체;MTT비색실험현시원암기인pim-3능구명현억제세포조망.결론:진핵표체중조질립pEGFP-N2/pim-3구건성공;원암기인pim-3능명현억제간암세포조망.