中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2007年
1期
12-16
,共5页
郑美娟%李敏%王志成%罗飞%罗庆礼%储德勇%李丛磊%沈继龙
鄭美娟%李敏%王誌成%囉飛%囉慶禮%儲德勇%李叢磊%瀋繼龍
정미연%리민%왕지성%라비%라경례%저덕용%리총뢰%침계룡
日本血吸虫%信号蛋白14-3-3%毕赤酵母菌%真核表达
日本血吸蟲%信號蛋白14-3-3%畢赤酵母菌%真覈錶達
일본혈흡충%신호단백14-3-3%필적효모균%진핵표체
目的 在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性.方法 以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,亚克隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌表达载体pPICZαB.测序正确后,重组质粒经电转化转染至毕赤酵母菌X-33菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取诱导上清进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotbng)分析.用间接ELISA法比较毕赤酵母菌表达的rSj14-3-3和原核表达rSj14-3-3检测血吸虫病患者血清抗体的特异性和敏感性.结果 目的基因已在酵母菌基因组中得到整合,PCR扩增得到约1 300 bp的片段.经甲醇诱导,Sj14-3-3表达并分泌到培养上清中.表达产物经SDS-PAGE测定为Mr 35 000.Western blotting结果显示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3单克隆抗体识别,表明该真核表达产物具有免疫反应性.间接ELISA检测结果表明,该重组蛋白检测36份急性血吸虫病患者血清rSj14-3-3抗体,阳性率为81%.与12份华支睪吸虫感染者血清未见交叉反应,32份健康人血清假阳性反应率为93%.以原核表达的rSj14-3-3为抗原,间接ELISA检测,36份急性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3,抗体阳性率为88.9%;与12份华支睪吸虫感染者的交叉反应率为16.7%,32份健康人血清假阳性反应率为12.5%,其差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 在毕赤酵母菌中成功表达了Si14-3-3,培养上清中产物丰度较高,且免疫反应性良好.
目的 在畢赤酵母菌(Pichia pastoris)錶達繫統中錶達日本血吸蟲信號蛋白14-3-3(Sj14-3-3),併與原覈錶達rSj14-3-3比較其抗原性.方法 以重組質粒pET28a-rSj14-3-3為模闆,PCR擴增Sj14-3-3基因,將特異片段連接到pMD18-T載體,DNA序列分析後,亞剋隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌錶達載體pPICZαB.測序正確後,重組質粒經電轉化轉染至畢赤酵母菌X-33菌株,經抗生素Zeocin篩選得到高拷貝轉化子.經甲醇誘導錶達,取誘導上清進行十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質印跡法(Western blotbng)分析.用間接ELISA法比較畢赤酵母菌錶達的rSj14-3-3和原覈錶達rSj14-3-3檢測血吸蟲病患者血清抗體的特異性和敏感性.結果 目的基因已在酵母菌基因組中得到整閤,PCR擴增得到約1 300 bp的片段.經甲醇誘導,Sj14-3-3錶達併分泌到培養上清中.錶達產物經SDS-PAGE測定為Mr 35 000.Western blotting結果顯示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3單剋隆抗體識彆,錶明該真覈錶達產物具有免疫反應性.間接ELISA檢測結果錶明,該重組蛋白檢測36份急性血吸蟲病患者血清rSj14-3-3抗體,暘性率為81%.與12份華支睪吸蟲感染者血清未見交扠反應,32份健康人血清假暘性反應率為93%.以原覈錶達的rSj14-3-3為抗原,間接ELISA檢測,36份急性血吸蟲病患者血清的rSj14-3-3,抗體暘性率為88.9%;與12份華支睪吸蟲感染者的交扠反應率為16.7%,32份健康人血清假暘性反應率為12.5%,其差異均無統計學意義(P＞0.05). 結論 在畢赤酵母菌中成功錶達瞭Si14-3-3,培養上清中產物豐度較高,且免疫反應性良好.
목적 재필적효모균(Pichia pastoris)표체계통중표체일본혈흡충신호단백14-3-3(Sj14-3-3),병여원핵표체rSj14-3-3비교기항원성.방법 이중조질립pET28a-rSj14-3-3위모판,PCR확증Sj14-3-3기인,장특이편단련접도pMD18-T재체,DNA서렬분석후,아극륭목적편단Sj14-3-3지효모균분비표체재체pPICZαB.측서정학후,중조질립경전전화전염지필적효모균X-33균주,경항생소Zeocin사선득도고고패전화자.경갑순유도표체,취유도상청진행십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화단백질인적법(Western blotbng)분석.용간접ELISA법비교필적효모균표체적rSj14-3-3화원핵표체rSj14-3-3검측혈흡충병환자혈청항체적특이성화민감성.결과 목적기인이재효모균기인조중득도정합,PCR확증득도약1 300 bp적편단.경갑순유도,Sj14-3-3표체병분비도배양상청중.표체산물경SDS-PAGE측정위Mr 35 000.Western blotting결과현시,Mr 35 000단백가피Sj14-3-3단극륭항체식별,표명해진핵표체산물구유면역반응성.간접ELISA검측결과표명,해중조단백검측36빈급성혈흡충병환자혈청rSj14-3-3항체,양성솔위81%.여12빈화지역흡충감염자혈청미견교차반응,32빈건강인혈청가양성반응솔위93%.이원핵표체적rSj14-3-3위항원,간접ELISA검측,36빈급성혈흡충병환자혈청적rSj14-3-3,항체양성솔위88.9%;여12빈화지역흡충감염자적교차반응솔위16.7%,32빈건강인혈청가양성반응솔위12.5%,기차이균무통계학의의(P＞0.05). 결론 재필적효모균중성공표체료Si14-3-3,배양상청중산물봉도교고,차면역반응성량호.
