生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
10期
1828-1831
,共4页
吴新东%陈芳%李鑫%邹毅辉%邱巍%高剑峰
吳新東%陳芳%李鑫%鄒毅輝%邱巍%高劍峰
오신동%진방%리흠%추의휘%구외%고검봉
混合池%三维筛选%BAC文库%绵羊
混閤池%三維篩選%BAC文庫%綿羊
혼합지%삼유사선%BAC문고%면양
本研究利用中国美利奴细毛羊全基因组BAC文库,构建了可供快速筛选的两级水平的混合池,一级混合池和二级混合池(Primary pools and secondary pools).一级混合池基于每一384-well盘而构建,由盘、行,列三维混合池组成,二级混合池基于整个BAC文库而构建.设计了一种基于PCR技术的快速筛选方法,先筛选二级混合池m再根据结果筛选相应的一级混合池.利用此方法只需一步共66个PCR反应即可从BAC丈库中7.4万个克隆中筛选出1个阳性克隆,或三步100个以内的PCR反应筛选出多个阳性克隆.以绵羊基因组多态性分子标记BF94-1为引物,用一步共66个PCR反应成功筛选到1个阳性克隆373D13.
本研究利用中國美利奴細毛羊全基因組BAC文庫,構建瞭可供快速篩選的兩級水平的混閤池,一級混閤池和二級混閤池(Primary pools and secondary pools).一級混閤池基于每一384-well盤而構建,由盤、行,列三維混閤池組成,二級混閤池基于整箇BAC文庫而構建.設計瞭一種基于PCR技術的快速篩選方法,先篩選二級混閤池m再根據結果篩選相應的一級混閤池.利用此方法隻需一步共66箇PCR反應即可從BAC丈庫中7.4萬箇剋隆中篩選齣1箇暘性剋隆,或三步100箇以內的PCR反應篩選齣多箇暘性剋隆.以綿羊基因組多態性分子標記BF94-1為引物,用一步共66箇PCR反應成功篩選到1箇暘性剋隆373D13.
본연구이용중국미리노세모양전기인조BAC문고,구건료가공쾌속사선적량급수평적혼합지,일급혼합지화이급혼합지(Primary pools and secondary pools).일급혼합지기우매일384-well반이구건,유반、행,렬삼유혼합지조성,이급혼합지기우정개BAC문고이구건.설계료일충기우PCR기술적쾌속사선방법,선사선이급혼합지m재근거결과사선상응적일급혼합지.이용차방법지수일보공66개PCR반응즉가종BAC장고중7.4만개극륭중사선출1개양성극륭,혹삼보100개이내적PCR반응사선출다개양성극륭.이면양기인조다태성분자표기BF94-1위인물,용일보공66개PCR반응성공사선도1개양성극륭373D13.
