东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
9期
89-96
,共8页
鞠会艳%高玉伟%杨松涛%夏咸柱
鞠會豔%高玉偉%楊鬆濤%夏鹹柱
국회염%고옥위%양송도%하함주
犬瘟热病毒%融合蛋白基因%重组腺病毒
犬瘟熱病毒%融閤蛋白基因%重組腺病毒
견온열병독%융합단백기인%중조선병독
利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒.首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF.再以含CAV-2 SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变.电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72 ku.在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性.
利用pVAX1載體的錶達元件CMV啟動子和poly(A)多聚腺苷痠信號構建瞭含犬瘟熱病毒融閤蛋白基因(F)的重組犬腺病毒.首先,利用酶切、連接等實驗方法構建瞭含CDV啟動子F蛋白基因錶達盒的轉移質粒pVAXΔE3LPF.再以含CAV-2 SY株全基因組的pPoly2-CAV-2為載體,構建重組質粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂質體介導方法轉染MDCK細胞,轉染3次後,細胞齣現瞭典型的犬腺病毒感染樣病變.電鏡負染和切片觀察、酶切、PCR擴增及測序鑒定的結果錶明,成功構建瞭含犬瘟熱病毒融閤蛋白基因的重組犬腺病毒,錶達的融閤蛋白分子質量為72 ku.在MDCK細胞上連續傳30代試驗錶明重組病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遺傳穩定性.
이용pVAX1재체적표체원건CMV계동자화poly(A)다취선감산신호구건료함견온열병독융합단백기인(F)적중조견선병독.수선,이용매절、련접등실험방법구건료함CDV계동자F단백기인표체합적전이질립pVAXΔE3LPF.재이함CAV-2 SY주전기인조적pPoly2-CAV-2위재체,구건중조질립pCAV-2-pVAXLPF,이용지질체개도방법전염MDCK세포,전염3차후,세포출현료전형적견선병독감염양병변.전경부염화절편관찰、매절、PCR확증급측서감정적결과표명,성공구건료함견온열병독융합단백기인적중조견선병독,표체적융합단백분자질량위72 ku.재MDCK세포상련속전30대시험표명중조병독CAV-2-pVAXLPF구유량호적유전은정성.
