CAJ | 학술논문

为了获得牛γ干扰素表达产物及其多克隆抗体,利用分子生物学软件分析GenBank公布的牛γ干扰素的氨基酸序列,针对这一基因序列设计了一对特异性引物,并从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR扩增以及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠埃希菌x-LI Blue感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,经纯化后免疫接种小鼠,用ELISA测定小鼠血清中抗体效价.结果表明,RT-PCR扩增到510 bp的片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符.Western blot分析结果表明,重组蛋白能与His-tag的单克隆抗体反应,说明该蛋白具有良好的免疫活性.用ELISA测定小鼠血清的抗体效价均在1:32 000以上,说明该蛋白免疫效果较好,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础.
위료획득우γ간우소표체산물급기다극륭항체,이용분자생물학연건분석GenBank공포적우γ간우소적안기산서렬,침대저일기인서렬설계료일대특이성인물,병종우비장림파세포제취기인조총RNA,채용반전록-취합매련반응(RT-PCR)기술확증출IFN-γ기인,여pMD18-T재체련접후진행매절、PCR확증이급서렬측정화분석,병장기련접도pQE-30원핵표체재체중,명명위pQE30-IFN-γ,전화도대장애희균x-LI Blue감수태세포,1.0 mmol/L IPTG 37℃유도표체,경순화후면역접충소서,용ELISA측정소서혈청중항체효개.결과표명,RT-PCR확증도510 bp적편단,중조단백대소위22 ku,여예기대소상부.Western blot분석결과표명,중조단백능여His-tag적단극륭항체반응,설명해단백구유량호적면역활성.용ELISA측정소서혈청적항체효개균재1:32 000이상,설명해단백면역효과교호,위하일보연구간우소적공능전정료기출.