CAJ | 학술논문

α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义.本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreen 1-opLA,将其转染至猪(Sus scrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人α-LA的细胞.根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2-ZsGreen1真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体；脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞；RT-PCR方法检测目的基因的表达.结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2-ZsGreen1 -opLA构建成功；荧光显微镜下观察,转染了pIRES2-ZsGreen1 -opLA和pIRES2-ZsGreen1空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核；筛选重组细胞的最小G418浓度为400 ng/μL; RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到.本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreen 1-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞.
α-유청단백(α-lactalbumin,α-LA)시포유동물유즙중일충중요적단백질,부함궤체필수안기산화지련안기산,기겁가적안기산비례、역흡수성이급공능특이성,사득α-LA재영유인개체정상생장중구유중요적의의.본실험지재구건인α-유청단백진핵표체재체pIRES2-ZsGreen 1-opLA,장기전염지저(Sus scrofa)적성섬유세포,획득은정표체인α-LA적세포.근거저기인밀마자편애성우화병합성인α-유청단백기인mRNA서렬opLA,병장기정향극륭입pIRES2-ZsGreen1진핵표체재체,쌍매절급측서방법감정중조재체；지질체개도적방법장재체전염입배양적저성섬유세포,형광현미경하관찰전염효과,G418항성사선중조세포；RT-PCR방법검측목적기인적표체.결과표명,통과매절이급측서감정득도적중조재체pIRES2-ZsGreen1 -opLA구건성공；형광현미경하관찰,전염료pIRES2-ZsGreen1 -opLA화pIRES2-ZsGreen1공재체적세포균발출록색형광,차형광다집중우세포핵；사선중조세포적최소G418농도위400 ng/μL; RT-PCR법검측도여목적기인대소일치적편단,이미전염조화전염공재체조균미검측도.본실험성공구건진핵표체재체pIRES2-ZsGreen 1-opLA,병획득은정표체목적기인적저성섬유세포,해세포가작위진일보연구전기인극륭저적공체세포.