CAJ | 학술논문

拟通过RNA干扰技术特异下调人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)基因的表达,减少hHO-1的产量从而降低胆红素的产生,探讨在胆红素产生前就阻断其产生,为临床早期防治新生儿高胆红素血症及胆红素中毒性脑病探索一种新的有效手段.针对hHO-1基因设计并化学合成三对小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA).采用脂质体转染法将siRNA转染入人肝脏细胞株HL-7702;荧光显微镜检测siRNA转染细胞的效率;转染siRNA 1～2天后经RT-PCR和Western印迹方法检测hHO-1表达水平和蛋白质量;并采用HO-1诱导剂血红素诱导或hHO-1表达质粒转染细胞以上调hHO-1表达,检测siRNA干扰后hHO-1产量和酶活性.结果显示:设计的三对siRNA能不同程度的特异下调hHO-1表达,筛选获得抑制效果最佳的siRNA-3.siRNA-3抑制hHO-1呈现浓度与时间依赖性.与非特异对照siRNA及未处理组比较,血红素诱导和hHO-1表达质粒转染均能上调HL-7702细胞内hHO-1表达,提高hHO-1产量,但转染siRNA-3后hHO-1表达明显抑制,同时hHO-1活性随着基因表达下调而下降.实验表明设计合成的siRNA-3抑制效果明显.siRNA-3通过降解hHO-1,减少hHO-1产量,降低酶活性,最终减少胆红素产生,从而使RNA干扰技术成为降低新生儿高胆红素血症和胆红素中毒性脑病发生的一种候选方法.
의통과RNA간우기술특이하조인혈홍소가양매-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)기인적표체,감소hHO-1적산량종이강저담홍소적산생,탐토재담홍소산생전취조단기산생,위림상조기방치신생인고담홍소혈증급담홍소중독성뇌병탐색일충신적유효수단.침대hHO-1기인설계병화학합성삼대소분자간우RNA(small interfering RNA,siRNA).채용지질체전염법장siRNA전염입인간장세포주HL-7702;형광현미경검측siRNA전염세포적효솔;전염siRNA 1～2천후경RT-PCR화Western인적방법검측hHO-1표체수평화단백질량;병채용HO-1유도제혈홍소유도혹hHO-1표체질립전염세포이상조hHO-1표체,검측siRNA간우후hHO-1산량화매활성.결과현시:설계적삼대siRNA능불동정도적특이하조hHO-1표체,사선획득억제효과최가적siRNA-3.siRNA-3억제hHO-1정현농도여시간의뢰성.여비특이대조siRNA급미처리조비교,혈홍소유도화hHO-1표체질립전염균능상조HL-7702세포내hHO-1표체,제고hHO-1산량,단전염siRNA-3후hHO-1표체명현억제,동시hHO-1활성수착기인표체하조이하강.실험표명설계합성적siRNA-3억제효과명현.siRNA-3통과강해hHO-1,감소hHO-1산량,강저매활성,최종감소담홍소산생,종이사RNA간우기술성위강저신생인고담홍소혈증화담홍소중독성뇌병발생적일충후선방법.