抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定
항Granulysin다극륭항체적제비급감정
Preparation and identification of polyclonal antibody to granulysin
  • 万方数据
    中国现代医学杂志 중국현대의학잡지
    CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
    2007年 11期 1320-1323 ,共4页

    钱(王争)%陈孙孝%周晔%谷明莉%陈燕%孔宪涛%邓安梅%仲人前

    전(왕쟁)%진손효%주엽%곡명리%진연%공헌도%산안매%중인전

    颗粒溶素%融合表达%抗体制备 顆粒溶素%融閤錶達%抗體製備
    과립용소%융합표체%항체제비
    目的 构建人颗粒溶素(granulysin,GNLY)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9 kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体.方法 采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28 a(+),构建pET28a(+)-GNLY表达载体.在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人颗粒溶素血清,以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价.结果 6×His融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1:6 000.结论 获得了纯化的颗粒溶素9 kD蛋白和anti-GNLY多抗血清,为今后对疾病中CTL和NK细胞活性的研究打下了基础.
    목적 구건인과립용소(granulysin,GNLY)질립병재대장간균중표체,순화득도9 kD목적단백편단,면역신서란대백토제비토항과립용소다극륭항체.방법 채용RT-PCR적방법획득편마인과립용소적cDNA서렬,장측서정학적편단극륭입pET-28 a(+),구건pET28a(+)-GNLY표체재체.재대장간균BL21(DE3)plysS중IPTG유도하표체6×His-융합단백,순화후면역신서란토,제비토항인과립용소혈청,이Western Blotting화ELISA방법분석기특이성화효개.결과 6×His융합단백면역신서란토성공획득다극륭항체,Western Blotting결과현시제비적항체구유교고적특이성,ELISA현시효개위1:6 000.결론 획득료순화적과립용소9 kD단백화anti-GNLY다항혈청,위금후대질병중CTL화NK세포활성적연구타하료기출.
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