浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2008年
6期
408-413
,共6页
王方昆%袁秀芳%刘思当%张存%徐丽华%王一成
王方昆%袁秀芳%劉思噹%張存%徐麗華%王一成
왕방곤%원수방%류사당%장존%서려화%왕일성
猪流感%重组NP蛋白%ELISA
豬流感%重組NP蛋白%ELISA
저류감%중조NP단백%ELISA
用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法.ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37 ℃温育40 min,底物显色37 ℃ 15 min.经重复性试验、交叉试验、竞争抑制试验等试验,结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好.利用TG-ROC软件确定了自制ELISA(NP-ELISA)酶标板的临界值为0.20,特异性和敏感性分别为95.83%和91.43%.与美国IDEXX试剂盒相比较,符合率为94.00%,无显著性差异.用已建立的ELISA方法检测临床血清样本356份,总阳性率为35.40%.
用純化的H9N2亞型豬流感可溶重組NP蛋白作為包被抗原,建立瞭檢測豬流感抗體的間接ELISA方法.ELISA的最佳工作條件是:抗原包被濃度為12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃過夜;血清稀釋度為1∶40;酶標SPA稀釋度為1∶10 000,37 ℃溫育40 min,底物顯色37 ℃ 15 min.經重複性試驗、交扠試驗、競爭抑製試驗等試驗,結果錶明該方法特異性彊、靈敏度高、重複性好.利用TG-ROC軟件確定瞭自製ELISA(NP-ELISA)酶標闆的臨界值為0.20,特異性和敏感性分彆為95.83%和91.43%.與美國IDEXX試劑盒相比較,符閤率為94.00%,無顯著性差異.用已建立的ELISA方法檢測臨床血清樣本356份,總暘性率為35.40%.
용순화적H9N2아형저류감가용중조NP단백작위포피항원,건립료검측저류감항체적간접ELISA방법.ELISA적최가공작조건시:항원포피농도위12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃과야;혈청희석도위1∶40;매표SPA희석도위1∶10 000,37 ℃온육40 min,저물현색37 ℃ 15 min.경중복성시험、교차시험、경쟁억제시험등시험,결과표명해방법특이성강、령민도고、중복성호.이용TG-ROC연건학정료자제ELISA(NP-ELISA)매표판적림계치위0.20,특이성화민감성분별위95.83%화91.43%.여미국IDEXX시제합상비교,부합솔위94.00%,무현저성차이.용이건립적ELISA방법검측림상혈청양본356빈,총양성솔위35.40%.
