医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2010年
3期
189-194
,共6页
冯志伟%李长燕%陈慧%金超智%唐刘君%张卜兮%原艳芝%詹轶群%王建%杨晓明
馮誌偉%李長燕%陳慧%金超智%唐劉君%張蔔兮%原豔芝%詹軼群%王建%楊曉明
풍지위%리장연%진혜%금초지%당류군%장복혜%원염지%첨질군%왕건%양효명
GATA-1%酵母双杂交%蛋白质相互作用%免疫共沉淀%荧光素酶试验
GATA-1%酵母雙雜交%蛋白質相互作用%免疫共沉澱%熒光素酶試驗
GATA-1%효모쌍잡교%단백질상호작용%면역공침정%형광소매시험
目的 利用酵母双杂交技术从人脑cDNA文库中筛选与人GATA-1相互作用的蛋白质.方法 从人K562细胞中扩增出全长GATA1基因,设计引物将其3段截断体亚克隆入酵母表达载体pDBLeu中,转化至AH109感受态酵母中,利用酵母双杂交技术筛选人脑cDNA文库中与其相互作用的蛋白质,阳性克隆通过回转及免疫共沉淀试验进行验证,利用3xGATA荧光素酶报告基因对相互作用蛋白质进行功能验证.结果 成功构建出酵母诱饵蛋白表达质粒pDBLeu-GATA1(1),pDBLeu-GATA1(2),pDBLeu-GATA1(3),筛到34个阳性克隆,用生物信息学分析及回转验证得到5个与GATA-1相互作用的候选蛋白,通过免疫共沉淀试验进一步验证,获得3个蛋白质能与GATA-1相互作用,分别是ECSIT,EFEMP1和GPS2.荧光素酶试验表明这3个蛋白质均能对GATA1的转录活性产生影响,证实它们之间的相互作用具有影响GATA1转录的功能.结论 应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀试验,从人脑cDNA文库中成功获得3个与GATA-1相互作用并对其转录活性具有调节作用的蛋白质,为研究GATA1蛋白质的功能提供了新的线索.
目的 利用酵母雙雜交技術從人腦cDNA文庫中篩選與人GATA-1相互作用的蛋白質.方法 從人K562細胞中擴增齣全長GATA1基因,設計引物將其3段截斷體亞剋隆入酵母錶達載體pDBLeu中,轉化至AH109感受態酵母中,利用酵母雙雜交技術篩選人腦cDNA文庫中與其相互作用的蛋白質,暘性剋隆通過迴轉及免疫共沉澱試驗進行驗證,利用3xGATA熒光素酶報告基因對相互作用蛋白質進行功能驗證.結果 成功構建齣酵母誘餌蛋白錶達質粒pDBLeu-GATA1(1),pDBLeu-GATA1(2),pDBLeu-GATA1(3),篩到34箇暘性剋隆,用生物信息學分析及迴轉驗證得到5箇與GATA-1相互作用的候選蛋白,通過免疫共沉澱試驗進一步驗證,穫得3箇蛋白質能與GATA-1相互作用,分彆是ECSIT,EFEMP1和GPS2.熒光素酶試驗錶明這3箇蛋白質均能對GATA1的轉錄活性產生影響,證實它們之間的相互作用具有影響GATA1轉錄的功能.結論 應用酵母雙雜交技術及免疫共沉澱試驗,從人腦cDNA文庫中成功穫得3箇與GATA-1相互作用併對其轉錄活性具有調節作用的蛋白質,為研究GATA1蛋白質的功能提供瞭新的線索.
목적 이용효모쌍잡교기술종인뇌cDNA문고중사선여인GATA-1상호작용적단백질.방법 종인K562세포중확증출전장GATA1기인,설계인물장기3단절단체아극륭입효모표체재체pDBLeu중,전화지AH109감수태효모중,이용효모쌍잡교기술사선인뇌cDNA문고중여기상호작용적단백질,양성극륭통과회전급면역공침정시험진행험증,이용3xGATA형광소매보고기인대상호작용단백질진행공능험증.결과 성공구건출효모유이단백표체질립pDBLeu-GATA1(1),pDBLeu-GATA1(2),pDBLeu-GATA1(3),사도34개양성극륭,용생물신식학분석급회전험증득도5개여GATA-1상호작용적후선단백,통과면역공침정시험진일보험증,획득3개단백질능여GATA-1상호작용,분별시ECSIT,EFEMP1화GPS2.형광소매시험표명저3개단백질균능대GATA1적전록활성산생영향,증실타문지간적상호작용구유영향GATA1전록적공능.결론 응용효모쌍잡교기술급면역공침정시험,종인뇌cDNA문고중성공획득3개여GATA-1상호작용병대기전록활성구유조절작용적단백질,위연구GATA1단백질적공능제공료신적선색.
