CAJ | 학술논문

目的:克隆通粳1号水稻乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)基因,并在大肠杆菌中进行体外表达.方法:提取通粳1号水稻幼根总RNA,RT-PCR法扩增ALDH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pET5a表达质粒中,转化BL21 (DE3)宿主菌,平板培养筛选,挑取阳性菌落并提取质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列.含重组质粒的BL21(DE3)进行常规LB扩大培养,用不同浓度的IPTG作用不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.结果:质粒中插入的ALDH 片段为1 668bp,含有完整的开放阅读框架,序列与GenBank比较无差异,插入方向正确无误,表达蛋白分子量为61.8kDa左右,符合预期值,IPTG最佳诱导时间为3h,0.1 mmol/L～O.8 mmoL/L浓度的IPTG作用效果无显著差异.结论:该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ALDH的作用和应用生物工程法大量获得ALDH奠定基础.
목적:극륭통갱1호수도을철탈경매(aldehyde dehydrogenase,ALDH)기인,병재대장간균중진행체외표체.방법:제취통갱1호수도유근총RNA,RT-PCR법확증ALDH기인개방열독광가편단,쌍매절후련접지pET5a표체질립중,전화BL21 (DE3)숙주균,평판배양사선,도취양성균락병제취질립,매절、전영감정삽입편단병측정기서렬.함중조질립적BL21(DE3)진행상규LB확대배양,용불동농도적IPTG작용불동시간진행유도표체,SDS-PAGE검측표체산물.결과:질립중삽입적ALDH 편단위1 668bp,함유완정적개방열독광가,서렬여GenBank비교무차이,삽입방향정학무오,표체단백분자량위61.8kDa좌우,부합예기치,IPTG최가유도시간위3h,0.1 mmol/L～O.8 mmoL/L농도적IPTG작용효과무현저차이.결론:해기인적성공극륭화표체위진일보연구수도중ALDH적작용화응용생물공정법대량획득ALDH전정기출.