华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2012年
1期
35-38
,共4页
张志远%张继希%徐红运%刘肖萍%卢晓艳%段二珍%夏平安%崔保安
張誌遠%張繼希%徐紅運%劉肖萍%盧曉豔%段二珍%夏平安%崔保安
장지원%장계희%서홍운%류초평%로효염%단이진%하평안%최보안
猪Fc受体γ单位%克隆%原核表达%多克隆抗体
豬Fc受體γ單位%剋隆%原覈錶達%多剋隆抗體
저Fc수체γ단위%극륭%원핵표체%다극륭항체
应用RT-PCR技术从90日龄健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-FcRγ,成功表达了分子量约为29 kDa的γ亚单位重组蛋白.将重组蛋白FcRγ-His免疫小鼠,制备获得鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶8000.Western-blotting结果表明,制备的鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体可以与重组γ亚单位蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性.成功克隆出猪Fc受体γ亚单位基因并表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础.
應用RT-PCR技術從90日齡健康仔豬肺巨噬細胞中剋隆齣豬Fcγ亞單位的cDNA序列,併將其亞剋隆到原覈錶達載體pET-32a中,構建重組錶達質粒pET-FcRγ,成功錶達瞭分子量約為29 kDa的γ亞單位重組蛋白.將重組蛋白FcRγ-His免疫小鼠,製備穫得鼠抗FcRγ-His重組蛋白多剋隆抗體,將得到的重組蛋白多剋隆抗體採用間接ELISA和Western-blotting試驗方法檢測,ELISA測定多剋隆抗體的效價為1∶8000.Western-blotting結果錶明,製備的鼠抗FcRγ-His重組蛋白多剋隆抗體可以與重組γ亞單位蛋白進行特異性結閤,從而證明重組蛋白具有較好的免疫原性.成功剋隆齣豬Fc受體γ亞單位基因併錶達,為進一步研究其結構與功能奠定瞭基礎.
응용RT-PCR기술종90일령건강자저폐거서세포중극륭출저Fcγ아단위적cDNA서렬,병장기아극륭도원핵표체재체pET-32a중,구건중조표체질립pET-FcRγ,성공표체료분자량약위29 kDa적γ아단위중조단백.장중조단백FcRγ-His면역소서,제비획득서항FcRγ-His중조단백다극륭항체,장득도적중조단백다극륭항체채용간접ELISA화Western-blotting시험방법검측,ELISA측정다극륭항체적효개위1∶8000.Western-blotting결과표명,제비적서항FcRγ-His중조단백다극륭항체가이여중조γ아단위단백진행특이성결합,종이증명중조단백구유교호적면역원성.성공극륭출저Fc수체γ아단위기인병표체,위진일보연구기결구여공능전정료기출.
