作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2012年
7期
1187-1195
,共9页
刘玉汇%王丽%杨宏羽%余斌%李元铭%张俊莲%王蒂
劉玉彙%王麗%楊宏羽%餘斌%李元銘%張俊蓮%王蒂
류옥회%왕려%양굉우%여빈%리원명%장준련%왕체
马铃薯%颗粒结合型淀粉合酶%基因克隆%序列分析%RNAi载体
馬鈴藷%顆粒結閤型澱粉閤酶%基因剋隆%序列分析%RNAi載體
마령서%과립결합형정분합매%기인극륭%서렬분석%RNAi재체
GBSSI是马铃薯块茎中控制直链淀粉合成的关键酶,为培育高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料,根据GenBank登录号X58453的序列设计特异引物,采用RT-PCR技术获得马铃薯块茎GBSSI相似基因,并利用生物信息学相关软件分析,预测GBSSI相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能.结果表明,克隆的GBSI相似基因与报道的GBSSI基因序列相似性达到99.78％,其开放阅读框长1 824 bp,编码607个氨基酸,具有许多重要功能位点.三级结构预测结果表明,该蛋白具有淀粉合成功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为EU403426.以此基因CDS内542 bp的靶标序列作为干扰区段,扩增GBSSI的正反向基因片段,并引入237 bp的内含子序列,构建由Patatin启动子驱动的具有“正义基因片段gbss A-内含子VPI-ABI3-like protein-反义基因片段gbss B”的植物干扰表达载体pBI121g-PgABI.本研究结果将为淀粉合成的进一步研究和高支链淀粉含量或纯支链淀粉含量的马铃薯品种的培育奠定基础.
GBSSI是馬鈴藷塊莖中控製直鏈澱粉閤成的關鍵酶,為培育高支鏈澱粉含量或純支鏈澱粉含量的轉基因馬鈴藷材料,根據GenBank登錄號X58453的序列設計特異引物,採用RT-PCR技術穫得馬鈴藷塊莖GBSSI相似基因,併利用生物信息學相關軟件分析,預測GBSSI相似基因cDNA序列編碼的蛋白質結構和功能.結果錶明,剋隆的GBSI相似基因與報道的GBSSI基因序列相似性達到99.78％,其開放閱讀框長1 824 bp,編碼607箇氨基痠,具有許多重要功能位點.三級結構預測結果錶明,該蛋白具有澱粉閤成功能,基因序列已註冊到GenBank,序列登錄號為EU403426.以此基因CDS內542 bp的靶標序列作為榦擾區段,擴增GBSSI的正反嚮基因片段,併引入237 bp的內含子序列,構建由Patatin啟動子驅動的具有“正義基因片段gbss A-內含子VPI-ABI3-like protein-反義基因片段gbss B”的植物榦擾錶達載體pBI121g-PgABI.本研究結果將為澱粉閤成的進一步研究和高支鏈澱粉含量或純支鏈澱粉含量的馬鈴藷品種的培育奠定基礎.
GBSSI시마령서괴경중공제직련정분합성적관건매,위배육고지련정분함량혹순지련정분함량적전기인마령서재료,근거GenBank등록호X58453적서렬설계특이인물,채용RT-PCR기술획득마령서괴경GBSSI상사기인,병이용생물신식학상관연건분석,예측GBSSI상사기인cDNA서렬편마적단백질결구화공능.결과표명,극륭적GBSI상사기인여보도적GBSSI기인서렬상사성체도99.78％,기개방열독광장1 824 bp,편마607개안기산,구유허다중요공능위점.삼급결구예측결과표명,해단백구유정분합성공능,기인서렬이주책도GenBank,서렬등록호위EU403426.이차기인CDS내542 bp적파표서렬작위간우구단,확증GBSSI적정반향기인편단,병인입237 bp적내함자서렬,구건유Patatin계동자구동적구유“정의기인편단gbss A-내함자VPI-ABI3-like protein-반의기인편단gbss B”적식물간우표체재체pBI121g-PgABI.본연구결과장위정분합성적진일보연구화고지련정분함량혹순지련정분함량적마령서품충적배육전정기출.
