CAJ | 학술논문

以烟草(Nicotianatabacum var.samsum)叶片为材料,提取RNA,分离mRNA,进行RT-PCR扩增编码二氢吡啶二羧酸合成酶(DHDPS)的cDNA片段.序列分析表明,得到971个核苷酸的片段.与发表的序列相比,成熟蛋白N-端编码区缺失了21个核苷酸,且第627位核苷酸发生了C到T的改变,但没有引起氨基酸的变化.将dhdps cDNA编码区的第410和411位核苷酸由AC突变为TT,这一突变使DHDPS成熟蛋白的第104位氨基酸由天冬酰胺变为异亮氨酸.以玉米(Zea mays L.)总DNA为模板,PCR扩增DHDPS叶绿体转运肽的编码序列,序列分析结果显示,扩增片段中含有DHDPS转运肽完整编码区162个核苷酸及成熟蛋白N-端编码区21个核苷酸.将突变后的ak(天冬氨酸激酶)基因和dhdps cDNA与CaMV35S启动子、转运肽序列及潮霉素抗性基因连接,构建表达载体pRHAK和pRHDH,用基因枪轰击法将pRHAK和pRTDH转入玉米胚性愈伤组织,得到再生植株.经分子检测证明,目的片段已整合到玉米基因组中.T1代植株的游离氨基酸含量测定显示,部分转入ak基因的植株中,叶片和种子中游离苏氨酸的含量提高3～5倍.部分转入dhdps cDNA的植株中,叶片和种子中游离赖氨酸含量分别提高了4倍和1倍.
이연초(Nicotianatabacum var.samsum)협편위재료,제취RNA,분리mRNA,진행RT-PCR확증편마이경필정이최산합성매(DHDPS)적cDNA편단.서렬분석표명,득도971개핵감산적편단.여발표적서렬상비,성숙단백N-단편마구결실료21개핵감산,차제627위핵감산발생료C도T적개변,단몰유인기안기산적변화.장dhdps cDNA편마구적제410화411위핵감산유AC돌변위TT,저일돌변사DHDPS성숙단백적제104위안기산유천동선알변위이량안산.이옥미(Zea mays L.)총DNA위모판,PCR확증DHDPS협록체전운태적편마서렬,서렬분석결과현시,확증편단중함유DHDPS전운태완정편마구162개핵감산급성숙단백N-단편마구21개핵감산.장돌변후적ak(천동안산격매)기인화dhdps cDNA여CaMV35S계동자、전운태서렬급조매소항성기인련접,구건표체재체pRHAK화pRHDH,용기인창굉격법장pRHAK화pRTDH전입옥미배성유상조직,득도재생식주.경분자검측증명,목적편단이정합도옥미기인조중.T1대식주적유리안기산함량측정현시,부분전입ak기인적식주중,협편화충자중유리소안산적함량제고3～5배.부분전입dhdps cDNA적식주중,협편화충자중유리뢰안산함량분별제고료4배화1배.