CAJ | 학술논문

目的探讨丝裂霉素C处理Swiss-3T3成纤维细胞作为饲细胞的条件,了解兔角膜缘于细胞克隆化培养的增殖状况.设计对照实验研究.研究对象兔角膜缘干细胞单纯培养组,兔角膜缘干细胞与Swiss-3T3成纤维细胞作为饲细胞的混合培养组.方法采用DMEM/F12培养基进行细胞培养,观察4.0μμg/ml丝裂霉素C作用不同时间后3T3细胞数量的变化.DispaseⅡ酶消化兔角膜缘上皮细胞,与饲细胞混合接种,观察干细胞克隆形成情况,比较各代、各组的细胞克隆形成率(CFE).用EDTA去除饲细胞,间接免疫荧光染色检测角膜缘干细胞克隆团表达增殖细胞核抗原(PCNA)情况.主要指标细胞数/毫升,细胞克隆形成率.结果4.0μg/ml丝裂霉素C处理2.5小时的Swiss-3T3细胞,培养期间(约12日)细胞数量无明显变化,可作为饲细胞.与饲细胞共同培养的兔角膜缘干细胞形成细胞克隆团,细胞的平均CFE比较:有饲细胞组角膜缘干细胞明显高于无饲细胞组(t=2.982,P<0.01).兔角膜缘干细胞冻存复苏后平均CFE比较,有饲细胞组明显高于无饲细胞组(t=3.007,P<0.01).兔角膜缘干细胞克隆团中细胞PCNA染色为阳性.结论角膜缘干细胞与作为饲细胞的Swiss-3T3成纤维细胞共同培养形成细胞克隆,其中含有干细胞,且具有高增殖力.
목적탐토사렬매소C처리Swiss-3T3성섬유세포작위사세포적조건,료해토각막연우세포극륭화배양적증식상황.설계대조실험연구.연구대상토각막연간세포단순배양조,토각막연간세포여Swiss-3T3성섬유세포작위사세포적혼합배양조.방법채용DMEM/F12배양기진행세포배양,관찰4.0μμg/ml사렬매소C작용불동시간후3T3세포수량적변화.DispaseⅡ매소화토각막연상피세포,여사세포혼합접충,관찰간세포극륭형성정황,비교각대、각조적세포극륭형성솔(CFE).용EDTA거제사세포,간접면역형광염색검측각막연간세포극륭단표체증식세포핵항원(PCNA)정황.주요지표세포수/호승,세포극륭형성솔.결과4.0μg/ml사렬매소C처리2.5소시적Swiss-3T3세포,배양기간(약12일)세포수량무명현변화,가작위사세포.여사세포공동배양적토각막연간세포형성세포극륭단,세포적평균CFE비교:유사세포조각막연간세포명현고우무사세포조(t=2.982,P<0.01).토각막연간세포동존복소후평균CFE비교,유사세포조명현고우무사세포조(t=3.007,P<0.01).토각막연간세포극륭단중세포PCNA염색위양성.결론각막연간세포여작위사세포적Swiss-3T3성섬유세포공동배양형성세포극륭,기중함유간세포,차구유고증식력.