CAJ | 학술논문

目的:Western blot免疫印迹分析骨髓干细胞移植后mdx鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化.方法:实验于2004-09/12在中山大学附属第一医院神经科实验室完成.①选取7～8周龄mdx鼠25只,随机数字表法分为骨髓移植4,8,12,16周组、空白对照组,5只/组.另选取4～6周龄C57鼠20只作为供体鼠,10周龄C57鼠5只作为阳性对照组.②各组在移植前均给予照射剂量为7Gy的放疗预处理.放疗完毕后,骨髓移植4,8,12,16周组均进行尾静脉细胞移植,移植细胞数为2×107/只,0.3～0.5 mL;空白对照组、阳性对照组尾静脉输入0.3 mL磷酸盐缓冲液.③骨髓移植4,8,12,16周组分别于对应时间点处死,取其腓肠肌,制备抗肌萎缩蛋白样品,进行抗肌萎缩蛋白Western blot免疫印迹分析,以GAPDH作为内参.结果:25只7～8周龄mdx鼠、5只10周龄C57鼠全部进入结果分析.骨髓干细胞移植后抗肌萎缩蛋白Western Blot免疫印迹分析结果:空白对照组无抗肌萎缩蛋白的表达;骨髓移植4周组仅可见抗肌萎缩蛋白的徽弱表达,dystrophin/GAPDH灰度比值约为0.095±0.267;骨髓移植12周组约为0.218±0.338;随骨髓移植时间的延长抗肌萎缩蛋白表达量逐渐增加,移植后16周的表达量较移植后8周明显增加(0.393±0.385,0.173±0.284;t=6.062,P＜0.05),但仍明显低于阳性对照组1.172±0.328(t=3.14,P＜0.05).结论:骨髓干细胞移植mdx鼠后应用Western Blot免疫印迹分析可干不同时间检测到抗肌萎缩蛋白的表达,且随移植时间延长表达量增多,提示骨髓干细胞移植可长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生.
목적:Western blot면역인적분석골수간세포이식후mdx서항기위축단백표체적변화.방법:실험우2004-09/12재중산대학부속제일의원신경과실험실완성.①선취7～8주령mdx서25지,수궤수자표법분위골수이식4,8,12,16주조、공백대조조,5지/조.령선취4～6주령C57서20지작위공체서,10주령C57서5지작위양성대조조.②각조재이식전균급여조사제량위7Gy적방료예처리.방료완필후,골수이식4,8,12,16주조균진행미정맥세포이식,이식세포수위2×107/지,0.3～0.5 mL;공백대조조、양성대조조미정맥수입0.3 mL린산염완충액.③골수이식4,8,12,16주조분별우대응시간점처사,취기비장기,제비항기위축단백양품,진행항기위축단백Western blot면역인적분석,이GAPDH작위내삼.결과:25지7～8주령mdx서、5지10주령C57서전부진입결과분석.골수간세포이식후항기위축단백Western Blot면역인적분석결과:공백대조조무항기위축단백적표체;골수이식4주조부가견항기위축단백적휘약표체,dystrophin/GAPDH회도비치약위0.095±0.267;골수이식12주조약위0.218±0.338;수골수이식시간적연장항기위축단백표체량축점증가,이식후16주적표체량교이식후8주명현증가(0.393±0.385,0.173±0.284;t=6.062,P＜0.05),단잉명현저우양성대조조1.172±0.328(t=3.14,P＜0.05).결론:골수간세포이식mdx서후응용Western Blot면역인적분석가간불동시간검측도항기위축단백적표체,차수이식시간연장표체량증다,제시골수간세포이식가장구지속삼여수손골격기적수복여재생.