贵州农业科学
貴州農業科學
귀주농업과학
GUIZHOU AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
3期
1-4
,共4页
陈艳%柴友荣%张迪%冯瑜
陳豔%柴友榮%張迪%馮瑜
진염%시우영%장적%풍유
芸薹属%RNA干扰(RNAi)%TT19%载体构建
蕓薹屬%RNA榦擾(RNAi)%TT19%載體構建
예대속%RNA간우(RNAi)%TT19%재체구건
为构建芸薹属TT19基因家族的RNAi载体,为芸薹属植物的种皮色素、观赏色彩等性状的研究和修饰打基础.利用PCR克隆芸薹属TT19基因家族的RNAi片段,采用双酶切将其反义片段和正义片段分别从T-载体亚克隆到平台载体pFGC5941M的启动子与间隔区之间和间隔区与终止子之间,形成RNAi载体,转化大肠杆菌并完成PCR鉴定,再转化根癌农杆菌LBA4404得到工程菌株.结果表明:克隆得到200 bp(含人工酶切位点)的芸薹属TT19基因家族RNAi片段BTT19I,其对应于甘蓝型油菜BnTT19-1 mRNA的363～540 bp,其反义和正义片段分别被NcoI+AatII和BamHI+XbaI双酶切亚克隆到pFGC5941M中,得到10552 bp的RNAi载体pFGC5941M-BTT19I(简称pBTT19I).成功构建了芸薹属TT19基因家族的RNAi载体.
為構建蕓薹屬TT19基因傢族的RNAi載體,為蕓薹屬植物的種皮色素、觀賞色綵等性狀的研究和脩飾打基礎.利用PCR剋隆蕓薹屬TT19基因傢族的RNAi片段,採用雙酶切將其反義片段和正義片段分彆從T-載體亞剋隆到平檯載體pFGC5941M的啟動子與間隔區之間和間隔區與終止子之間,形成RNAi載體,轉化大腸桿菌併完成PCR鑒定,再轉化根癌農桿菌LBA4404得到工程菌株.結果錶明:剋隆得到200 bp(含人工酶切位點)的蕓薹屬TT19基因傢族RNAi片段BTT19I,其對應于甘藍型油菜BnTT19-1 mRNA的363～540 bp,其反義和正義片段分彆被NcoI+AatII和BamHI+XbaI雙酶切亞剋隆到pFGC5941M中,得到10552 bp的RNAi載體pFGC5941M-BTT19I(簡稱pBTT19I).成功構建瞭蕓薹屬TT19基因傢族的RNAi載體.
위구건예대속TT19기인가족적RNAi재체,위예대속식물적충피색소、관상색채등성상적연구화수식타기출.이용PCR극륭예대속TT19기인가족적RNAi편단,채용쌍매절장기반의편단화정의편단분별종T-재체아극륭도평태재체pFGC5941M적계동자여간격구지간화간격구여종지자지간,형성RNAi재체,전화대장간균병완성PCR감정,재전화근암농간균LBA4404득도공정균주.결과표명:극륭득도200 bp(함인공매절위점)적예대속TT19기인가족RNAi편단BTT19I,기대응우감람형유채BnTT19-1 mRNA적363～540 bp,기반의화정의편단분별피NcoI+AatII화BamHI+XbaI쌍매절아극륭도pFGC5941M중,득도10552 bp적RNAi재체pFGC5941M-BTT19I(간칭pBTT19I).성공구건료예대속TT19기인가족적RNAi재체.
