山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
19期
37-38
,共2页
秦凤金%段晓华%殷红梅%盛梅%丁雪涛
秦鳳金%段曉華%慇紅梅%盛梅%丁雪濤
진봉금%단효화%은홍매%성매%정설도
钙结合蛋白S1OOA8%钙结合蛋白S100A9%异源二聚体%表达%纯化
鈣結閤蛋白S1OOA8%鈣結閤蛋白S100A9%異源二聚體%錶達%純化
개결합단백S1OOA8%개결합단백S100A9%이원이취체%표체%순화
目的 体外构建S100A8和S100A9的异源二聚体(S100A8/S100A9),为其分子生物学功能研究提供依据.方法 原核表达载体pET28a-S100A8和pMT28a-S100A9分别转化感受态细胞BL21,并用异丙基硫化-P-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达蛋白,Ni-NTA His柱纯化蛋白,将等量纯化蛋白在一定钙离子浓度下室温孵育30 min,通过SDS-PAGE和Western blot方法验证异源二聚体的形成.结果 质粒pET28a-S100A8和pET28a-Sl00A9在相对分子质量约11 kD和14 kD处出现新生的蛋白条带,可溶性分析发现两个蛋白均可以以可溶的形式存在,纯化后得到了目的蛋白,S100A8和S100A9室温孵育后形成了异源二聚体.结论 Sl00A8和S100A9蛋白可以在体外形成异源二聚体.
目的 體外構建S100A8和S100A9的異源二聚體(S100A8/S100A9),為其分子生物學功能研究提供依據.方法 原覈錶達載體pET28a-S100A8和pMT28a-S100A9分彆轉化感受態細胞BL21,併用異丙基硫化-P-D半乳糖苷(IPTG)誘導錶達蛋白,Ni-NTA His柱純化蛋白,將等量純化蛋白在一定鈣離子濃度下室溫孵育30 min,通過SDS-PAGE和Western blot方法驗證異源二聚體的形成.結果 質粒pET28a-S100A8和pET28a-Sl00A9在相對分子質量約11 kD和14 kD處齣現新生的蛋白條帶,可溶性分析髮現兩箇蛋白均可以以可溶的形式存在,純化後得到瞭目的蛋白,S100A8和S100A9室溫孵育後形成瞭異源二聚體.結論 Sl00A8和S100A9蛋白可以在體外形成異源二聚體.
목적 체외구건S100A8화S100A9적이원이취체(S100A8/S100A9),위기분자생물학공능연구제공의거.방법 원핵표체재체pET28a-S100A8화pMT28a-S100A9분별전화감수태세포BL21,병용이병기류화-P-D반유당감(IPTG)유도표체단백,Ni-NTA His주순화단백,장등량순화단백재일정개리자농도하실온부육30 min,통과SDS-PAGE화Western blot방법험증이원이취체적형성.결과 질립pET28a-S100A8화pET28a-Sl00A9재상대분자질량약11 kD화14 kD처출현신생적단백조대,가용성분석발현량개단백균가이이가용적형식존재,순화후득도료목적단백,S100A8화S100A9실온부육후형성료이원이취체.결론 Sl00A8화S100A9단백가이재체외형성이원이취체.
