解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
2期
214-219
,共6页
王文锋%夏西超%王雪参%吕黎%杨洪%宁黔冀
王文鋒%夏西超%王雪參%呂黎%楊洪%寧黔冀
왕문봉%하서초%왕설삼%려려%양홍%저검기
血蓝蛋白%基因克隆%cDNA末端快速扩增%实时荧光定量PCR%时空表达%日本沼虾
血藍蛋白%基因剋隆%cDNA末耑快速擴增%實時熒光定量PCR%時空錶達%日本沼蝦
혈람단백%기인극륭%cDNA말단쾌속확증%실시형광정량PCR%시공표체%일본소하
目的 克隆日本沼虾血蓝蛋白基因,进行生物信息学及时空表达分析. 方法 利用cDNA末端快速扩增技术( RACE)从肝胰腺中克隆血蓝蛋白基因cDNA全长序列,用生物学软件对其序列进行生物信息学分析,时空表达分析采用实时荧光定量PCR方法. 结果 日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长2 151 bp,包含14 bp的5'UTR、148 bp的3'UTR和189 bp的开放阅读框(ORF).ORF编码663个氨基酸,预测分子量为76.65kD,理论等电点为5.42,含有典型的3个血蓝蛋白结构域和2个保守的铜离子结合位点.与淡水螯虾、凡纳滨对虾血蓝蛋白相似性分别为70％和63％.该基因在肝胰腺中的相对表达量最高,肌肉和血细胞表达较弱,大颚器官、表皮和卵巢几乎不表达:肝胰腺血蓝蛋白基因的表达量在蜕皮间期最高,蜕皮后期和蜕皮前期较低；嗜水气单胞菌刺激后肝胰腺中的表达量显著增加. 结论 与其他甲壳动物相似,日本沼虾血蓝蛋白基因具有典型的结构域和保守的铜离子结合位点,在蜕皮间期的肝胰腺中呈高表达,是参与机体免疫防御反应的一种重要分子.
目的 剋隆日本沼蝦血藍蛋白基因,進行生物信息學及時空錶達分析. 方法 利用cDNA末耑快速擴增技術( RACE)從肝胰腺中剋隆血藍蛋白基因cDNA全長序列,用生物學軟件對其序列進行生物信息學分析,時空錶達分析採用實時熒光定量PCR方法. 結果 日本沼蝦血藍蛋白基因cDNA全長2 151 bp,包含14 bp的5'UTR、148 bp的3'UTR和189 bp的開放閱讀框(ORF).ORF編碼663箇氨基痠,預測分子量為76.65kD,理論等電點為5.42,含有典型的3箇血藍蛋白結構域和2箇保守的銅離子結閤位點.與淡水螯蝦、凡納濱對蝦血藍蛋白相似性分彆為70％和63％.該基因在肝胰腺中的相對錶達量最高,肌肉和血細胞錶達較弱,大顎器官、錶皮和卵巢幾乎不錶達:肝胰腺血藍蛋白基因的錶達量在蛻皮間期最高,蛻皮後期和蛻皮前期較低；嗜水氣單胞菌刺激後肝胰腺中的錶達量顯著增加. 結論 與其他甲殼動物相似,日本沼蝦血藍蛋白基因具有典型的結構域和保守的銅離子結閤位點,在蛻皮間期的肝胰腺中呈高錶達,是參與機體免疫防禦反應的一種重要分子.
목적 극륭일본소하혈람단백기인,진행생물신식학급시공표체분석. 방법 이용cDNA말단쾌속확증기술( RACE)종간이선중극륭혈람단백기인cDNA전장서렬,용생물학연건대기서렬진행생물신식학분석,시공표체분석채용실시형광정량PCR방법. 결과 일본소하혈람단백기인cDNA전장2 151 bp,포함14 bp적5'UTR、148 bp적3'UTR화189 bp적개방열독광(ORF).ORF편마663개안기산,예측분자량위76.65kD,이론등전점위5.42,함유전형적3개혈람단백결구역화2개보수적동리자결합위점.여담수오하、범납빈대하혈람단백상사성분별위70％화63％.해기인재간이선중적상대표체량최고,기육화혈세포표체교약,대악기관、표피화란소궤호불표체:간이선혈람단백기인적표체량재세피간기최고,세피후기화세피전기교저；기수기단포균자격후간이선중적표체량현저증가. 결론 여기타갑각동물상사,일본소하혈람단백기인구유전형적결구역화보수적동리자결합위점,재세피간기적간이선중정고표체,시삼여궤체면역방어반응적일충중요분자.
