中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2012年
15期
24-30
,共7页
崔喜艳%刘晶%刘忠野%韩琳
崔喜豔%劉晶%劉忠野%韓琳
최희염%류정%류충야%한림
玉米%诱饵载体%SBEIIb%酵母双杂交
玉米%誘餌載體%SBEIIb%酵母雙雜交
옥미%유이재체%SBEIIb%효모쌍잡교
为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEIIb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵栽体.根据CDD和NCBI对SBEIIb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEIIb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体 pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接.构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵栽体 pGBKT7-SBEIIb-X对酵母菌AH109没有毒性作用；转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/ X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了 pGBKT7-SBEIIb-X具有自激活宿主菌AH109的作用.构建的酵母双杂交诱饵栽体pGBKT7- SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEIIb与其互作蛋白的作用位点奠定基础.
為探尋玉米澱粉分支酶(starch branching enzyme,SBEIIb)與其互作蛋白的作用位點,構建瞭酵母雙雜交誘餌栽體.根據CDD和NCBI對SBEIIb蛋白氨基痠序列的分析,確定玉米SBEIIb的功能域及非功能域,PCR擴增功能域及非功能域基因的目的片段,經迴收純化,用相同的限製性內切酶將其與載體 pGBKT7進行雙酶切後,分彆將目的基因片段與載體pGBKT7進行連接.構建瞭酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7-SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),轉化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,證明誘餌栽體 pGBKT7-SBEIIb-X對酵母菌AH109沒有毒性作用；轉化誘餌載體後的酵母菌AH109,在SD/-Trp/ X-α-Gal平闆上長齣白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平闆上不能生長,排除瞭 pGBKT7-SBEIIb-X具有自激活宿主菌AH109的作用.構建的酵母雙雜交誘餌栽體pGBKT7- SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),其錶達對酵母細胞無毒性及對報告基因無自激活作用,可為下一步分析SBEIIb與其互作蛋白的作用位點奠定基礎.
위탐심옥미정분분지매(starch branching enzyme,SBEIIb)여기호작단백적작용위점,구건료효모쌍잡교유이재체.근거CDD화NCBI대SBEIIb단백안기산서렬적분석,학정옥미SBEIIb적공능역급비공능역,PCR확증공능역급비공능역기인적목적편단,경회수순화,용상동적한제성내절매장기여재체 pGBKT7진행쌍매절후,분별장목적기인편단여재체pGBKT7진행련접.구건료효모쌍잡교유이재체pGBKT7-SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),전화효모균AH109적균액,OD600치재0.8이상,증명유이재체 pGBKT7-SBEIIb-X대효모균AH109몰유독성작용；전화유이재체후적효모균AH109,재SD/-Trp/ X-α-Gal평판상장출백색균락,재SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal평판상불능생장,배제료 pGBKT7-SBEIIb-X구유자격활숙주균AH109적작용.구건적효모쌍잡교유이재체pGBKT7- SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),기표체대효모세포무독성급대보고기인무자격활작용,가위하일보분석SBEIIb여기호작단백적작용위점전정기출.
