CAJ | 학술논문

目的研究bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,为基因转染治疗脑血管病寻找实验依据.方法体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞,应用脂质体转染法将bcl-2基因转染入神经细胞,建立氧糖剥夺模型,实验分为正常对照组、氧糖剥夺组和bcl-2转染组(转染bcl-2基因24 h后,进行氧糖剥夺),采用Western blot法、MTT法、流式细胞仪分别检测各组细胞的bcl-2蛋白表达、细胞活力及凋亡率.结果 SD大鼠大脑皮层神经细胞可纯化体外培养,纯度达到90%以上.成功建立了大鼠神经细胞体外氧糖剥夺模型,成功进行了质粒pc-DNA3.1-hbcl-2的转化、扩增及基因转染.对照组神经细胞bcl-2少量表达,氧糖剥夺组bcl-2蛋白微弱表达,转染组细胞bcl-2蛋白高表达,各组间差异均有统计学意义(均P＜0.01).MTT法检测结果显示,对照组细胞的吸光度值(A)为(0.851±0.034);氧糖剥夺组的A值为(0.648±0.030),与对照组相比明显降低(P＜0.01);转染组的A值为(0.787±0.004),低于对照组(P＜0.05),但明显高于氧糖剥夺组(P＜0.05).对照组神经细胞凋亡率为4.6%;氧糖剥夺损伤后细胞凋亡率明显增加,为19.6%;转染组细胞凋亡率与氧糖剥夺组相比有明显下降,为9.6%,差异有统计学意义(均P＜0.01).结论脂质体介导的bcl-2基因转染对氧糖剥夺损伤的大鼠大脑皮层神经细胞有明显保护作用.
목적 연구bcl-2기인전염대체외배양대서대뇌피층신경세포양당박탈손상적보호작용,위기인전염치료뇌혈관병심조실험의거.방법 체외배양신생대서대뇌피층신경세포,응용지질체전염법장bcl-2기인전염입신경세포,건립양당박탈모형,실험분위정상대조조、양당박탈조화bcl-2전염조(전염bcl-2기인24 h후,진행양당박탈),채용Western blot법、MTT법、류식세포의분별검측각조세포적bcl-2단백표체、세포활력급조망솔.결과 SD대서대뇌피층신경세포가순화체외배양,순도체도90%이상.성공건립료대서신경세포체외양당박탈모형,성공진행료질립pc-DNA3.1-hbcl-2적전화、확증급기인전염.대조조신경세포bcl-2소량표체,양당박탈조bcl-2단백미약표체,전염조세포bcl-2단백고표체,각조간차이균유통계학의의(균P＜0.01).MTT법검측결과현시,대조조세포적흡광도치(A)위(0.851±0.034);양당박탈조적A치위(0.648±0.030),여대조조상비명현강저(P＜0.01);전염조적A치위(0.787±0.004),저우대조조(P＜0.05),단명현고우양당박탈조(P＜0.05).대조조신경세포조망솔위4.6%;양당박탈손상후세포조망솔명현증가,위19.6%;전염조세포조망솔여양당박탈조상비유명현하강,위9.6%,차이유통계학의의(균P＜0.01).결론 지질체개도적bcl-2기인전염대양당박탈손상적대서대뇌피층신경세포유명현보호작용.