中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
6期
570-573
,共4页
国果%吴建伟%吴沁怡%付萍%张勇
國果%吳建偉%吳沁怡%付萍%張勇
국과%오건위%오심이%부평%장용
家蝇%几丁质酶%序列分析%基因克隆%表达
傢蠅%幾丁質酶%序列分析%基因剋隆%錶達
가승%궤정질매%서렬분석%기인극륭%표체
目的 对EST筛选得到的家蝇几丁质酶Ⅰ(MDC Ⅰ)基因进行序列分析,克隆其eDNA序列并在大肠杆菌中表达.方法 采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MDC Ⅰ基因,对其进行序列测定和分析.以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR方法对MDC Ⅰ基因进行扩增,以pET 28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果 MDC Ⅰ基因全长751 bp,编码251个氨基酸,理论分子量28,62家kDa;等电点5.78,有1个chitinase 18家族的活性位点.构建了具有正确基因序列的MDCⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21( DE3)中表达.结论 MDCⅠ基因可在原核表达系统中表达,为进一步研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.
目的 對EST篩選得到的傢蠅幾丁質酶Ⅰ(MDC Ⅰ)基因進行序列分析,剋隆其eDNA序列併在大腸桿菌中錶達.方法 採用EST測序技術從已構建的傢蠅幼蟲cDNA質粒文庫中篩選到MDC Ⅰ基因,對其進行序列測定和分析.以該基因的cDNA文庫質粒為模闆,通過PCR方法對MDC Ⅰ基因進行擴增,以pET 28a(+)為載體構建重組質粒,再轉化到錶達宿主菌大腸桿菌BL21(DE3)中,IPTG誘導錶達.錶達產物通過十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定.結果 MDC Ⅰ基因全長751 bp,編碼251箇氨基痠,理論分子量28,62傢kDa;等電點5.78,有1箇chitinase 18傢族的活性位點.構建瞭具有正確基因序列的MDCⅠ重組錶達質粒,重組蛋白在大腸桿菌BL21( DE3)中錶達.結論 MDCⅠ基因可在原覈錶達繫統中錶達,為進一步研究該蛋白的生物學、免疫學活性奠定瞭基礎.
목적 대EST사선득도적가승궤정질매Ⅰ(MDC Ⅰ)기인진행서렬분석,극륭기eDNA서렬병재대장간균중표체.방법 채용EST측서기술종이구건적가승유충cDNA질립문고중사선도MDC Ⅰ기인,대기진행서렬측정화분석.이해기인적cDNA문고질립위모판,통과PCR방법대MDC Ⅰ기인진행확증,이pET 28a(+)위재체구건중조질립,재전화도표체숙주균대장간균BL21(DE3)중,IPTG유도표체.표체산물통과십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)진행감정.결과 MDC Ⅰ기인전장751 bp,편마251개안기산,이론분자량28,62가kDa;등전점5.78,유1개chitinase 18가족적활성위점.구건료구유정학기인서렬적MDCⅠ중조표체질립,중조단백재대장간균BL21( DE3)중표체.결론 MDCⅠ기인가재원핵표체계통중표체,위진일보연구해단백적생물학、면역학활성전정료기출.
