CAJ | 학술논문

目的人β-防御素4(human β-defensin 4,HBD 4)对多种病原菌有杀伤作用.HBD4的自然表达水平极低,体外获得难度较大且价格昂贵.利用基因工程技术生产重组的HBD4成为研究的焦点.文中旨在构建HBD4真核表达载体,探讨真核细胞表达HBD4的可行性.方法用PCR法从已构建的重组克隆载体pMD18-T/HBD4中扩增出HBD4全长编码基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N2,构建pEGFP-N2/HBD4重组真核表达载体;通过脂质体转染法将pEGFP-N2/HBD4导入HEK293细胞,采用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot检测HBD4的mRNA和蛋白表达情况,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究.结果构建的重组真核表达载体pEGFP-N2/HBD4,经酶切鉴定、测序,证实插入的序列与Genebank中的HBD4基因序列完全相同.将pEGFP-N2/HBD4转染HEK293细胞,在转染细胞检测到HBD4mRNA表达.荧光显微镜下可在细胞膜及细胞质中观察到绿色荧光.Western blot分析显示:在pEGFP-N2/HBD4 转染的HEK293细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达.Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对铜绿假单胞菌具有较强的杀伤作用.结论成功构建了HBD4基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达出具有抗菌活性的HBD4多肽.
목적 인β-방어소4(human β-defensin 4,HBD 4)대다충병원균유살상작용.HBD4적자연표체수평겁저,체외획득난도교대차개격앙귀.이용기인공정기술생산중조적HBD4성위연구적초점.문중지재구건HBD4진핵표체재체,탐토진핵세포표체HBD4적가행성.방법용PCR법종이구건적중조극륭재체pMD18-T/HBD4중확증출HBD4전장편마기인,극륭입진핵표체재체pEGFP-N2,구건pEGFP-N2/HBD4중조진핵표체재체;통과지질체전염법장pEGFP-N2/HBD4도입HEK293세포,채용RT-PCR、형광현미경、Western blot검측HBD4적mRNA화단백표체정황,병대표체적HBD4진행항균활성적초보연구.결과구건적중조진핵표체재체pEGFP-N2/HBD4,경매절감정、측서,증실삽입적서렬여Genebank중적HBD4기인서렬완전상동.장pEGFP-N2/HBD4전염HEK293세포,재전염세포검측도HBD4mRNA표체.형광현미경하가재세포막급세포질중관찰도록색형광.Western blot분석현시:재pEGFP-N2/HBD4 전염적HEK293세포급세포배양액중검측도료HBD4단백적표체.Kirby-Bauer지편확산법증실표체적HBD4단백대동록가단포균구유교강적살상작용.결론성공구건료HBD4기인적진핵표체재체,병재HEK293세포중표체출구유항균활성적HBD4다태.