安徽农业大学学报
安徽農業大學學報
안휘농업대학학보
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY
2006年
1期
56-60
,共5页
谢国化%鲍鸣%仲大莲%余为一%李槿年
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CD8α%鸡%克隆%原核表达
CD8α%鷄%剋隆%原覈錶達
CD8α%계%극륭%원핵표체
应用RT-PCR技术,通过自行设计的1对引物以ConA诱导的鸡胸腺淋巴细胞RNA为模板,扩增出编码鸡CD8α链的无信号肽基因片段,大小为651 bp.该片段经酶切初步鉴定后,被插入pMD18-T载体进行测序,发现与已发表的鸡CD8α链基因序列的同源性达98%.进一步将该片段插入原核表达质粒,构建pGEX-4T-1-CD8α,并转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导培养并提取表达蛋白质.在SDS-PAGE电泳图谱中可见大小约为50 000的蛋白带,表明所克隆的编码鸡CD8α链无信号肽基因片段在原核细胞中得到表达.
應用RT-PCR技術,通過自行設計的1對引物以ConA誘導的鷄胸腺淋巴細胞RNA為模闆,擴增齣編碼鷄CD8α鏈的無信號肽基因片段,大小為651 bp.該片段經酶切初步鑒定後,被插入pMD18-T載體進行測序,髮現與已髮錶的鷄CD8α鏈基因序列的同源性達98%.進一步將該片段插入原覈錶達質粒,構建pGEX-4T-1-CD8α,併轉化大腸桿菌BL21.經IPTG誘導培養併提取錶達蛋白質.在SDS-PAGE電泳圖譜中可見大小約為50 000的蛋白帶,錶明所剋隆的編碼鷄CD8α鏈無信號肽基因片段在原覈細胞中得到錶達.
응용RT-PCR기술,통과자행설계적1대인물이ConA유도적계흉선림파세포RNA위모판,확증출편마계CD8α련적무신호태기인편단,대소위651 bp.해편단경매절초보감정후,피삽입pMD18-T재체진행측서,발현여이발표적계CD8α련기인서렬적동원성체98%.진일보장해편단삽입원핵표체질립,구건pGEX-4T-1-CD8α,병전화대장간균BL21.경IPTG유도배양병제취표체단백질.재SDS-PAGE전영도보중가견대소약위50 000적단백대,표명소극륭적편마계CD8α련무신호태기인편단재원핵세포중득도표체.
