吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2008年
3期
415-419
,共5页
杨立彬%李树蕾%谭岩%许淑芬%汪军
楊立彬%李樹蕾%譚巖%許淑芬%汪軍
양립빈%리수뢰%담암%허숙분%왕군
TL1A%克隆,分子%原核表达%蛋白质纯化
TL1A%剋隆,分子%原覈錶達%蛋白質純化
TL1A%극륭,분자%원핵표체%단백질순화
目的:构建人肿瘤坏死因子样分子1A(TL1A)原核表达质粒并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白.方法:人HUVECs总RNA经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TL1A基因,克隆到pTA2载体,酶切和测序鉴定正确后构建重组原核表达质粒pQE-TL1A,并转化大肠杆菌M15[pREP4].IPTG诱导目的蛋白表达并进行Western blotting鉴定;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白.结果:目的基因经酶切其结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GenBank登录的序列(登录号AF520785)完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达相对分子质量约22000的目的蛋白;Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白能够与抗His单克隆抗体特异性结合.结论:成功地构建了重组原核表达质粒pQE-TL1A,并纯化获得高纯度重组TL1A蛋白.
目的:構建人腫瘤壞死因子樣分子1A(TL1A)原覈錶達質粒併誘導其錶達,純化及鑒定目的蛋白.方法:人HUVECs總RNA經逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)擴增TL1A基因,剋隆到pTA2載體,酶切和測序鑒定正確後構建重組原覈錶達質粒pQE-TL1A,併轉化大腸桿菌M15[pREP4].IPTG誘導目的蛋白錶達併進行Western blotting鑒定;鎳離子親和層析柱(Ni2+-NTA)純化靶蛋白.結果:目的基因經酶切其結果與預期相符,測序結果顯示目的基因與GenBank登錄的序列(登錄號AF520785)完全一緻;工程化大腸桿菌M15[pREP4]經IPTG誘導錶達相對分子質量約22000的目的蛋白;Western blotting鑒定結果顯示,重組蛋白能夠與抗His單剋隆抗體特異性結閤.結論:成功地構建瞭重組原覈錶達質粒pQE-TL1A,併純化穫得高純度重組TL1A蛋白.
목적:구건인종류배사인자양분자1A(TL1A)원핵표체질립병유도기표체,순화급감정목적단백.방법:인HUVECs총RNA경역전록취합매련식반응(RT-PCR)확증TL1A기인,극륭도pTA2재체,매절화측서감정정학후구건중조원핵표체질립pQE-TL1A,병전화대장간균M15[pREP4].IPTG유도목적단백표체병진행Western blotting감정;얼리자친화층석주(Ni2+-NTA)순화파단백.결과:목적기인경매절기결과여예기상부,측서결과현시목적기인여GenBank등록적서렬(등록호AF520785)완전일치;공정화대장간균M15[pREP4]경IPTG유도표체상대분자질량약22000적목적단백;Western blotting감정결과현시,중조단백능구여항His단극륭항체특이성결합.결론:성공지구건료중조원핵표체질립pQE-TL1A,병순화획득고순도중조TL1A단백.
