脑与神经疾病杂志
腦與神經疾病雜誌
뇌여신경질병잡지
JOURNAL OF BRAIN AND NERVOUS DISEASES
2009年
5期
350-353
,共4页
郑小芳%那波宏之%张洪涛
鄭小芳%那波宏之%張洪濤
정소방%나파굉지%장홍도
大鼠脑源性神经营养因子%条件性基因敲除%脑%增强绿色荧光蛋白
大鼠腦源性神經營養因子%條件性基因敲除%腦%增彊綠色熒光蛋白
대서뇌원성신경영양인자%조건성기인고제%뇌%증강록색형광단백
目的 构建大鼠脑源性神经营养因子(rBDNF)的条件性转基因小鼠载体,鉴定其在体外细胞系中的表达.方法 用PCR方法扩增rBDNF片断,插入pNAO载体(lox-Stop-lox-IRES-EGFP),构建成rBDNF条件性基因载体(lox-Stop-lox-rBDNF-IRES-EGFP),使用Fugene 6转染试剂,将其同Cre重组酶表达质粒pGK-Cre共同导入HEK-293细胞系中,通过荧光显微镜观察、PCR 及ELISA方法确定Cre-lox同源重组. 结果 经酶切和测序鉴定,rBDNF条件性基因载体构建成功.共转染后的HEK-293细胞中,观察到绿色荧光蛋白(EGFP)的强荧光表达;细胞基因组DNA中检测到Cre-lox基因重组;对rBDNF定量检测的ELISA结果显示,细胞内有大量的rBDNF释放到细胞外. 结论 rBDNF条件性基因载体构建成功,在体外细胞系中,检测到rBDNF及EGFP强表达,为转基因显微注射打下基础. 酶表达质粒pGK-Cre共同导入HEK-293细胞系中,通过荧光显微镜观察、PCR 及ELISA方法确定Cre-lox同源重组. 结果 经酶切和测序鉴定,rBDNF条件性基因 体构建成功.共转染后的HEK-293细胞中,观察到绿色荧光蛋白(EGFP)的强荧光表达;细胞基因组DNA中检测到Cre-lox基因重组;对rBDNF定量检测的ELISA结果显示,细胞内有大量的rBDNF释放到细胞外. 结论 rBDNF条件性基因载体构建成功,在体外细胞系
目的 構建大鼠腦源性神經營養因子(rBDNF)的條件性轉基因小鼠載體,鑒定其在體外細胞繫中的錶達.方法 用PCR方法擴增rBDNF片斷,插入pNAO載體(lox-Stop-lox-IRES-EGFP),構建成rBDNF條件性基因載體(lox-Stop-lox-rBDNF-IRES-EGFP),使用Fugene 6轉染試劑,將其同Cre重組酶錶達質粒pGK-Cre共同導入HEK-293細胞繫中,通過熒光顯微鏡觀察、PCR 及ELISA方法確定Cre-lox同源重組. 結果 經酶切和測序鑒定,rBDNF條件性基因載體構建成功.共轉染後的HEK-293細胞中,觀察到綠色熒光蛋白(EGFP)的彊熒光錶達;細胞基因組DNA中檢測到Cre-lox基因重組;對rBDNF定量檢測的ELISA結果顯示,細胞內有大量的rBDNF釋放到細胞外. 結論 rBDNF條件性基因載體構建成功,在體外細胞繫中,檢測到rBDNF及EGFP彊錶達,為轉基因顯微註射打下基礎. 酶錶達質粒pGK-Cre共同導入HEK-293細胞繫中,通過熒光顯微鏡觀察、PCR 及ELISA方法確定Cre-lox同源重組. 結果 經酶切和測序鑒定,rBDNF條件性基因 體構建成功.共轉染後的HEK-293細胞中,觀察到綠色熒光蛋白(EGFP)的彊熒光錶達;細胞基因組DNA中檢測到Cre-lox基因重組;對rBDNF定量檢測的ELISA結果顯示,細胞內有大量的rBDNF釋放到細胞外. 結論 rBDNF條件性基因載體構建成功,在體外細胞繫
목적 구건대서뇌원성신경영양인자(rBDNF)적조건성전기인소서재체,감정기재체외세포계중적표체.방법 용PCR방법확증rBDNF편단,삽입pNAO재체(lox-Stop-lox-IRES-EGFP),구건성rBDNF조건성기인재체(lox-Stop-lox-rBDNF-IRES-EGFP),사용Fugene 6전염시제,장기동Cre중조매표체질립pGK-Cre공동도입HEK-293세포계중,통과형광현미경관찰、PCR 급ELISA방법학정Cre-lox동원중조. 결과 경매절화측서감정,rBDNF조건성기인재체구건성공.공전염후적HEK-293세포중,관찰도록색형광단백(EGFP)적강형광표체;세포기인조DNA중검측도Cre-lox기인중조;대rBDNF정량검측적ELISA결과현시,세포내유대량적rBDNF석방도세포외. 결론 rBDNF조건성기인재체구건성공,재체외세포계중,검측도rBDNF급EGFP강표체,위전기인현미주사타하기출. 매표체질립pGK-Cre공동도입HEK-293세포계중,통과형광현미경관찰、PCR 급ELISA방법학정Cre-lox동원중조. 결과 경매절화측서감정,rBDNF조건성기인 체구건성공.공전염후적HEK-293세포중,관찰도록색형광단백(EGFP)적강형광표체;세포기인조DNA중검측도Cre-lox기인중조;대rBDNF정량검측적ELISA결과현시,세포내유대량적rBDNF석방도세포외. 결론 rBDNF조건성기인재체구건성공,재체외세포계
