哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
3期
210-213
,共4页
刘毕欧%孙国勋%赵明明%施鹜丹%康鹏云%洪珞珈%张辰宇
劉畢歐%孫國勛%趙明明%施鶩丹%康鵬雲%洪珞珈%張辰宇
류필구%손국훈%조명명%시목단%강붕운%홍락가%장신우
Bikunin%分子克隆%表达载体%构建
Bikunin%分子剋隆%錶達載體%構建
Bikunin%분자극륭%표체재체%구건
目的 构建含有Bikunin的哺乳类细胞表达载体pSecTag2B-Bikunin,应用哺乳类细胞表达系统,表达分泌型Bikunin融合蛋白.方法 用RT-PCR方法,从人肝细胞系L02扩增Bikunin编码区序列,将其克隆于pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T-Bikunin,经酶切、PCR及测序鉴定后,将Bikunin亚克隆至哺乳类细胞表达载体pSecTag2B中.用磷酸钙法转染NIH3T3细胞,24 h后,Western blot检测浓缩25倍的细胞培养上清中融合蛋白的表达.结果 成功构建含有Bikunin的哺乳类细胞表达载体pSecTag2B-Bikunin.用磷酸钙法转染NIH3T3细胞,24 h后,Western blot检测浓缩25倍的细胞培养上清,有融合蛋白的表达.结论 本实验成功克隆并在真核表达系统表达了分泌型Bikunin.
目的 構建含有Bikunin的哺乳類細胞錶達載體pSecTag2B-Bikunin,應用哺乳類細胞錶達繫統,錶達分泌型Bikunin融閤蛋白.方法 用RT-PCR方法,從人肝細胞繫L02擴增Bikunin編碼區序列,將其剋隆于pMD18-T Simple Vector中構建pMD18-T-Bikunin,經酶切、PCR及測序鑒定後,將Bikunin亞剋隆至哺乳類細胞錶達載體pSecTag2B中.用燐痠鈣法轉染NIH3T3細胞,24 h後,Western blot檢測濃縮25倍的細胞培養上清中融閤蛋白的錶達.結果 成功構建含有Bikunin的哺乳類細胞錶達載體pSecTag2B-Bikunin.用燐痠鈣法轉染NIH3T3細胞,24 h後,Western blot檢測濃縮25倍的細胞培養上清,有融閤蛋白的錶達.結論 本實驗成功剋隆併在真覈錶達繫統錶達瞭分泌型Bikunin.
목적 구건함유Bikunin적포유류세포표체재체pSecTag2B-Bikunin,응용포유류세포표체계통,표체분비형Bikunin융합단백.방법 용RT-PCR방법,종인간세포계L02확증Bikunin편마구서렬,장기극륭우pMD18-T Simple Vector중구건pMD18-T-Bikunin,경매절、PCR급측서감정후,장Bikunin아극륭지포유류세포표체재체pSecTag2B중.용린산개법전염NIH3T3세포,24 h후,Western blot검측농축25배적세포배양상청중융합단백적표체.결과 성공구건함유Bikunin적포유류세포표체재체pSecTag2B-Bikunin.용린산개법전염NIH3T3세포,24 h후,Western blot검측농축25배적세포배양상청,유융합단백적표체.결론 본실험성공극륭병재진핵표체계통표체료분비형Bikunin.
