中国临床神经外科杂志
中國臨床神經外科雜誌
중국림상신경외과잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL NEUROSURGERY
2011年
10期
605-608
,共4页
毛峰%席桂发%杨洪宽%王宝峰%郭东生%雷霆
毛峰%席桂髮%楊洪寬%王寶峰%郭東生%雷霆
모봉%석계발%양홍관%왕보봉%곽동생%뢰정
人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1%慢病毒%基因转染%构建%鉴定
人類富含亮氨痠重複和免疫毬蛋白樣結構域1%慢病毒%基因轉染%構建%鑒定
인류부함량안산중복화면역구단백양결구역1%만병독%기인전염%구건%감정
目的 探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助.方法 用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-X HT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1l和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot 检测LRIG1 mRNA和蛋白表达.结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 mRNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功.结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达.
目的 探討構建人類富含亮氨痠重複和免疫毬蛋白樣結構域1(LRIG1)基因過錶達慢病毒錶達載體併轉染膠質瘤細胞繫U87細胞的技術方法,為研究LRIG1的功能提供幫助.方法 用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ雙酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒載體,瓊脂糖凝電泳迴收LRIG1片段和載體片段;通過T4連接酶將LRIG1基因連接至慢病毒載體上;按Lenti-X HT慢病毒包裝試劑盒說明包裝慢病毒;用EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ雙酶切法鑒定重組慢病毒載體;然後用plvxDsRed-monomer-n1l和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分彆轉染293T細胞和膠質瘤細胞繫U87細胞,熒光定量PCR和western blot 檢測LRIG1 mRNA和蛋白錶達.結果 U87細胞感染病毒載體後經嘌呤黴素篩選顯示細胞紅色熒光較空載體感染細胞減弱;實時PCR結果顯示LRIG1 mRNA過錶達組較對照明顯升高;提取感染後細胞蛋白,Western blot鑒定flag標籤蛋白錶達成功.結論 LRIG1基因慢病毒錶達載體能感染膠質瘤細胞繫U87細胞,可使外源基因穫得穩定錶達.
목적 탐토구건인류부함량안산중복화면역구단백양결구역1(LRIG1)기인과표체만병독표체재체병전염효질류세포계U87세포적기술방법,위연구LRIG1적공능제공방조.방법 용EcoR Ⅰ급BamH Ⅰ쌍매절LRIG1기인화plvxDsRed-monomer-n1만병독재체,경지당응전영회수LRIG1편단화재체편단;통과T4련접매장LRIG1기인련접지만병독재체상;안Lenti-X HT만병독포장시제합설명포장만병독;용EcoR Ⅰ급BamH Ⅰ쌍매절법감정중조만병독재체;연후용plvxDsRed-monomer-n1l화plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1분별전염293T세포화효질류세포계U87세포,형광정량PCR화western blot 검측LRIG1 mRNA화단백표체.결과 U87세포감염병독재체후경표령매소사선현시세포홍색형광교공재체감염세포감약;실시PCR결과현시LRIG1 mRNA과표체조교대조명현승고;제취감염후세포단백,Western blot감정flag표첨단백표체성공.결론 LRIG1기인만병독표체재체능감염효질류세포계U87세포,가사외원기인획득은정표체.
