协和医学杂志
協和醫學雜誌
협화의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF PEKING UNION MEDICAL COLLEGE HOSPITAL
2012年
1期
13-20
,共8页
吴焕文%梁智勇%师晓华%任新瑜%刘彤华
吳煥文%樑智勇%師曉華%任新瑜%劉彤華
오환문%량지용%사효화%임신유%류동화
层黏连蛋白%胰腺癌%化疗耐药%黏着斑激酶
層黏連蛋白%胰腺癌%化療耐藥%黏著斑激酶
층점련단백%이선암%화료내약%점착반격매
目的 探讨层黏连蛋白( laminin,LN)对胰腺癌细胞内在性耐药的影响,并探讨其作用机制.方法 选择胰腺癌细胞系AsPC-1,检测LN对盐酸吉西他滨(健择,gemcitabine,Gem)的细胞毒性及对Gem诱导细胞凋亡能力的影响.通过Western blot等方法检测LN对下游信号通路的影响；在AsPC-1中,过表达黏着斑激酶相关非激酶(focal adhesion kinase-related non-kinase,FRNK)或应用PF-573,228抑制黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)磷酸化与活性,检测FAK及其下游信号的抑制对LN作用的影响.结果 在胰腺癌细胞系AsPC-1中,LN处理使Gem的细胞毒性及Gem诱导细胞凋亡的能力显著降低.Gem作用72 h后,LN处理组细胞存活率为57.71％±6.08％,形成的克隆数目为55.33±5.01；而在无LN包被组,细胞存活率与形成的克隆数目分别为36.65％ ±4.14％及31.43 ±4.62(P均＜0.05)；LN处理组Annexin V标记阳性细胞百分数(41.00％±5.46％)较无LN处理组(55.70％±3.44％)显著下降(P＜0.05).LN能够时间依赖性上调AsPC-1细胞的FAKTyr397位点及Akt磷酸化水平,LN还可以显著增加AsPC-1细胞的survivin蛋白表达水平及BAD Ser-136位点磷酸化水平.过表达FRNK或应用PF-573,228能够显著抑制FAK磷酸化水平及其下游通路的活化,并能够对抗LN对胰腺癌内在性耐药的效应.应用PF-228可以使LN处理后Gem诱导的AsPC-1细胞凋亡率从26.77％±0.49％升高至38.53％ ±2.83％ (P＜0.05).结论 细胞外基质蛋白LN能够诱导胰腺癌细胞系对Gem产生内在性耐药.LN影响胰腺癌细胞内在性耐药的具体机制可能与FAK磷酸化及其下游PI3K-Akt通路活化、Bad Ser-136位点磷酸化与survivin表达水平改变有关,FAK靶向治疗与Gem联合在胰腺癌治疗中具有重要的潜在应用价值.
目的 探討層黏連蛋白( laminin,LN)對胰腺癌細胞內在性耐藥的影響,併探討其作用機製.方法 選擇胰腺癌細胞繫AsPC-1,檢測LN對鹽痠吉西他濱(健擇,gemcitabine,Gem)的細胞毒性及對Gem誘導細胞凋亡能力的影響.通過Western blot等方法檢測LN對下遊信號通路的影響；在AsPC-1中,過錶達黏著斑激酶相關非激酶(focal adhesion kinase-related non-kinase,FRNK)或應用PF-573,228抑製黏著斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)燐痠化與活性,檢測FAK及其下遊信號的抑製對LN作用的影響.結果 在胰腺癌細胞繫AsPC-1中,LN處理使Gem的細胞毒性及Gem誘導細胞凋亡的能力顯著降低.Gem作用72 h後,LN處理組細胞存活率為57.71％±6.08％,形成的剋隆數目為55.33±5.01；而在無LN包被組,細胞存活率與形成的剋隆數目分彆為36.65％ ±4.14％及31.43 ±4.62(P均＜0.05)；LN處理組Annexin V標記暘性細胞百分數(41.00％±5.46％)較無LN處理組(55.70％±3.44％)顯著下降(P＜0.05).LN能夠時間依賴性上調AsPC-1細胞的FAKTyr397位點及Akt燐痠化水平,LN還可以顯著增加AsPC-1細胞的survivin蛋白錶達水平及BAD Ser-136位點燐痠化水平.過錶達FRNK或應用PF-573,228能夠顯著抑製FAK燐痠化水平及其下遊通路的活化,併能夠對抗LN對胰腺癌內在性耐藥的效應.應用PF-228可以使LN處理後Gem誘導的AsPC-1細胞凋亡率從26.77％±0.49％升高至38.53％ ±2.83％ (P＜0.05).結論 細胞外基質蛋白LN能夠誘導胰腺癌細胞繫對Gem產生內在性耐藥.LN影響胰腺癌細胞內在性耐藥的具體機製可能與FAK燐痠化及其下遊PI3K-Akt通路活化、Bad Ser-136位點燐痠化與survivin錶達水平改變有關,FAK靶嚮治療與Gem聯閤在胰腺癌治療中具有重要的潛在應用價值.
목적 탐토층점련단백( laminin,LN)대이선암세포내재성내약적영향,병탐토기작용궤제.방법 선택이선암세포계AsPC-1,검측LN대염산길서타빈(건택,gemcitabine,Gem)적세포독성급대Gem유도세포조망능력적영향.통과Western blot등방법검측LN대하유신호통로적영향；재AsPC-1중,과표체점착반격매상관비격매(focal adhesion kinase-related non-kinase,FRNK)혹응용PF-573,228억제점착반격매(focal adhesion kinase,FAK)린산화여활성,검측FAK급기하유신호적억제대LN작용적영향.결과 재이선암세포계AsPC-1중,LN처리사Gem적세포독성급Gem유도세포조망적능력현저강저.Gem작용72 h후,LN처리조세포존활솔위57.71％±6.08％,형성적극륭수목위55.33±5.01；이재무LN포피조,세포존활솔여형성적극륭수목분별위36.65％ ±4.14％급31.43 ±4.62(P균＜0.05)；LN처리조Annexin V표기양성세포백분수(41.00％±5.46％)교무LN처리조(55.70％±3.44％)현저하강(P＜0.05).LN능구시간의뢰성상조AsPC-1세포적FAKTyr397위점급Akt린산화수평,LN환가이현저증가AsPC-1세포적survivin단백표체수평급BAD Ser-136위점린산화수평.과표체FRNK혹응용PF-573,228능구현저억제FAK린산화수평급기하유통로적활화,병능구대항LN대이선암내재성내약적효응.응용PF-228가이사LN처리후Gem유도적AsPC-1세포조망솔종26.77％±0.49％승고지38.53％ ±2.83％ (P＜0.05).결론 세포외기질단백LN능구유도이선암세포계대Gem산생내재성내약.LN영향이선암세포내재성내약적구체궤제가능여FAK린산화급기하유PI3K-Akt통로활화、Bad Ser-136위점린산화여survivin표체수평개변유관,FAK파향치료여Gem연합재이선암치료중구유중요적잠재응용개치.
