CAJ | 학술논문

目的研究联合应用重组人骨保护素(rhOPG-Fc)和阿伦膦酸钠(ALN)对破骨细胞抑制作用.方法进行人类OPG-Fc融合蛋白毕赤酵母表达株的构建和鉴定.酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞,与破骨细胞前体细胞RAW264.7按照4∶1比例混合,培养于96孔板中.9 d后,重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色(TRAP染色)鉴定后,分别使用10-5 g/L rhOPG-Fc、10 μmol/L ALN、10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN、5×10-6 g/L rhOPG-Fc +5 μmol/L ALN作用于混合细胞体系,并设空白对照.加药后3、7 d观察破骨细胞数目和形态,计算单位面积内TARP阳性细胞个数,并行骨磨片吸收陷窝计数.结果重组人骨保护素(rhOPG-Fc)分子量与预期结果相符合,蛋白印迹检测(Western blotting)显示,该条带可被抗免疫球蛋白IgG抗体别显色.小鼠成骨细胞与破骨细胞前体细胞RAW264.7混合培养后9 d,体系中出现大量多核成熟破骨细胞,TARP染色证实为成熟破骨细胞.加药3、7 d后,与对照组相比,其余各组破骨细胞TARP阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数均明显减少,以10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN组减少最为显著.结论重组人骨保护素(rhOPG-Fc)可以有效减少成熟破骨细胞数目并抑制其功能.联合应用rhOPG-Fc和阿伦膦酸钠可以交互抑制成熟破骨细胞功能.
목적연구연합응용중조인골보호소(rhOPG-Fc)화아륜련산납(ALN)대파골세포억제작용.방법진행인류OPG-Fc융합단백필적효모표체주적구건화감정.매소화법획취신생소서로골성골세포,여파골세포전체세포RAW264.7안조4∶1비례혼합,배양우96공판중.9 d후,중주석산염항산성린산매염색(TRAP염색)감정후,분별사용10-5 g/L rhOPG-Fc、10 μmol/L ALN、10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN、5×10-6 g/L rhOPG-Fc +5 μmol/L ALN작용우혼합세포체계,병설공백대조.가약후3、7 d관찰파골세포수목화형태,계산단위면적내TARP양성세포개수,병행골마편흡수함와계수.결과중조인골보호소(rhOPG-Fc)분자량여예기결과상부합,단백인적검측(Western blotting)현시,해조대가피항면역구단백IgG항체별현색.소서성골세포여파골세포전체세포RAW264.7혼합배양후9 d,체계중출현대량다핵성숙파골세포,TARP염색증실위성숙파골세포.가약3、7 d후,여대조조상비,기여각조파골세포TARP양성세포개수,골마편흡수함와계수균명현감소,이10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN조감소최위현저.결론중조인골보호소(rhOPG-Fc)가이유효감소성숙파골세포수목병억제기공능.연합응용rhOPG-Fc화아륜련산납가이교호억제성숙파골세포공능.