CAJ | 학술논문

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量.方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB/c小鼠并进行攻击感染实验.在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率.并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体.结果成功表达出rSj14-3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28.20%、第2组43.10%、第3组40.00%;各组的减卵率分别为(按以上组序)41.80%、57.50%、55.70%.各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6.8、第2组t=8.7、第3组t=7.3,各组P值均＜0.01;减卵率:第1组t=11.23、第2组t=11.54、第3组t=7.99,各组P值均＜0.01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:x2=8.96,P＜0.05;减卵率:x2=15.69,P＜0.05)、第1组与第3组间(减虫率:x2=6.52,P＜0.05;减卵率:x2=12.52,P＜0.05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:x2=1.20,P＞0.05;减卵率:x2=0.93,P＞0.05).各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显.结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性最好.
목적관찰불동제량중조일본혈흡충(중국대륙주)신호단백14-3-3(rSj14-3-3)적면역보호성,이탐토최가적면역제량.방법이역전록-다취매련반응(RT-PCR)확증Sj14-3-3기인,병장기아극륭입원핵표체재체pET28a,연후전화대장애희균진행유도표체;용십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、전세탈화투석적방법제비순화적rSj14-3-3단백,분5조(제1、2、3조위rSj14-3-3단백50μg、100μg화300μg실험조,제4、5조분별위복씨좌제화생리염수대조조)면역BALB/c소서병진행공격감염실험.재미유공격감염6주후,부살소서계산각조적감충솔화감란솔.병재시험과정중류취불동시기소서혈청,검측항Sj14-3-3특이성IgG항체.결과성공표체출rSj14-3-3단백,순화단백면역소서행공격감염후각실험조적감충솔위제1조28.20%、제2조43.10%、제3조40.00%;각조적감란솔분별위(안이상조서)41.80%、57.50%、55.70%.각실험조여대조조비교,차이유통계학의의(감충솔:제1조t=6.8、제2조t=8.7、제3조t=7.3,각조P치균＜0.01;감란솔:제1조t=11.23、제2조t=11.54、제3조t=7.99,각조P치균＜0.01);각실험조간량량비교,제1조여제2조간(감충솔:x2=8.96,P＜0.05;감란솔:x2=15.69,P＜0.05)、제1조여제3조간(감충솔:x2=6.52,P＜0.05;감란솔:x2=12.52,P＜0.05)차이유통계학의의;제2、3량조간차이무통계학의의(감충솔:x2=1.20,P＞0.05;감란솔:x2=0.93,P＞0.05).각실험조적항Sj14-3-3특이성총IgG수평도유현저승고,소측적4개아형중이IgG1화IgG2a아형승고위주,IgG2b화IgG3아형승고불명현.결론중조Sj14-3-3적면역보호성여면역제량유일정관계,이100μg항원량면역소서획득적보호성최호.