中华劳动卫生职业病杂志
中華勞動衛生職業病雜誌
중화노동위생직업병잡지
CHINESE JOURNAL OF INDUSTRIAL HYGIENE AND OCCUPATIONAL DISEASES
2003年
1期
57-60
,共4页
江高峰%庄志雄%刘起展%何云%杜柳涛
江高峰%莊誌雄%劉起展%何雲%杜柳濤
강고봉%장지웅%류기전%하운%두류도
遗传载体%RNA,反义%脱氧鸟嘌呤核苷酸类%GTP磷酸水解酶类
遺傳載體%RNA,反義%脫氧鳥嘌呤覈苷痠類%GTP燐痠水解酶類
유전재체%RNA,반의%탈양조표령핵감산류%GTP린산수해매류
目的构建人修复基因hMTH1反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T.方法提取人胚肺成纤维细胞(HLF)总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMTH1基因cDNA保守序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1,构建hMTH1基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T,并转染细胞.用Western-blot法检验载体抑制hMTH1蛋白表达的效率.结果经RT-PCR获得423bp产物,T载体克隆后,经DNA测序,确定该片段为hMTH1基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T,测序后确证.该载体转染细胞后,可使hMTH1蛋白水平 下降约46%.结论成功构建hMTH1基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-T.
目的構建人脩複基因hMTH1反義RNA真覈錶達載體pEGFP-C1-T.方法提取人胚肺成纖維細胞(HLF)總RNA,反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)擴增hMTH1基因cDNA保守序列,經pGEM-T載體剋隆後雙酶切,將cDNA保守序列反嚮插入綠色熒光蛋白錶達載體pEGFP-C1,構建hMTH1基因反義RNA真覈錶達載體pEGFP-C1-T,併轉染細胞.用Western-blot法檢驗載體抑製hMTH1蛋白錶達的效率.結果經RT-PCR穫得423bp產物,T載體剋隆後,經DNA測序,確定該片段為hMTH1基因cDNA,進而構建反義RNA真覈錶達載體pEGFP-C1-T,測序後確證.該載體轉染細胞後,可使hMTH1蛋白水平 下降約46%.結論成功構建hMTH1基因反義RNA真覈錶達載體pEGFP-C1-T.
목적구건인수복기인hMTH1반의RNA진핵표체재체pEGFP-C1-T.방법제취인배폐성섬유세포(HLF)총RNA,반전록-취합매련반응(RT-PCR)확증hMTH1기인cDNA보수서렬,경pGEM-T재체극륭후쌍매절,장cDNA보수서렬반향삽입록색형광단백표체재체pEGFP-C1,구건hMTH1기인반의RNA진핵표체재체pEGFP-C1-T,병전염세포.용Western-blot법검험재체억제hMTH1단백표체적효솔.결과경RT-PCR획득423bp산물,T재체극륭후,경DNA측서,학정해편단위hMTH1기인cDNA,진이구건반의RNA진핵표체재체pEGFP-C1-T,측서후학증.해재체전염세포후,가사hMTH1단백수평 하강약46%.결론성공구건hMTH1기인반의RNA진핵표체재체pEGFP-C1-T.
