CAJ | 학술논문

目的为了建立检测绵羊整联蛋白受体0lv亚基基因（ITGAV）mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法，构建目的基因ITGAV、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线。方法根据GeneBank中绵羊ITGAV和β-actin基因编码区保守序列，设计特异引物。选择绵羊卵巢组织cDNA为模板进行PCR扩增．产物回收纯化后，与PMD18-T载体连接、转化感受态DH5α，筛选白色茵落并摇茵培养，经PCR和测序鉴定获得阳性ITGAV、β-actin重组质粒；将阳性重组质粒107—102梯度稀释作为模板，进行实时荧光定量PCR。系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果ITGAV基因相关系数（RSq）=0．998，扩增效率（Eff）=104．7％；β-actin基因相关系数（RSq）=0．998，扩增效率（Em）=111．6％。经熔解曲线分析，ITGAV基因熔解温度为84．66℃，β-actin为86．92℃，2个基因片段的熔解曲线均呈单峰，扩增曲线呈典型的S型动力学曲线．指数扩增期和平台期十分明显，表现为理想的扩增曲线。结论成功构建目的基因ITGAV、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线。
목적위료건립검측면양정련단백수체0lv아기기인（ITGAV）mRNA상대전록수평적실시정량PCR방법，구건목적기인ITGAV、내삼기인β-actin적표준질립화표준곡선。방법근거GeneBank중면양ITGAV화β-actin기인편마구보수서렬，설계특이인물。선택면양란소조직cDNA위모판진행PCR확증．산물회수순화후，여PMD18-T재체련접、전화감수태DH5α，사선백색인락병요인배양，경PCR화측서감정획득양성ITGAV、β-actin중조질립；장양성중조질립107—102제도희석작위모판，진행실시형광정량PCR。계통연건자동생성표준곡선급회귀방정。결과ITGAV기인상관계수（RSq）=0．998，확증효솔（Eff）=104．7％；β-actin기인상관계수（RSq）=0．998，확증효솔（Em）=111．6％。경용해곡선분석，ITGAV기인용해온도위84．66℃，β-actin위86．92℃，2개기인편단적용해곡선균정단봉，확증곡선정전형적S형동역학곡선．지수확증기화평태기십분명현，표현위이상적확증곡선。결론성공구건목적기인ITGAV、내삼기인β-actin적표준질립화표준곡선。