军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
1期
65-69
,共5页
王纪东%王小慧%李媛%张娟琨%詹林盛
王紀東%王小慧%李媛%張娟琨%詹林盛
왕기동%왕소혜%리원%장연곤%첨림성
切刻内切酶%恒温扩增%NEMA%核酸扩增技术
切刻內切酶%恆溫擴增%NEMA%覈痠擴增技術
절각내절매%항온확증%NEMA%핵산확증기술
目的 采用切刻内切酶介导恒温扩增技术(nicking enzyme mediated isothermal amplification,NEMA)扩增蜡样芽孢杆菌质粒,考察缓冲体系、温度、离子浓度等条件对扩增效率的影响.方法 通过独特的引物设计,采用NEMA技术扩增蜡样芽孢杆菌质粒,通过系列实验优化了缓冲体系、温度和离子浓度等条件,采用琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果.结果 通过设计不同长度片段的扩增产物,证明采用NEMA技术进行恒温扩增引物设计的正确性.扩增反应中,缓冲体系的组成、扩增温度、体系镁离子及二甲基亚砜(DMSO)的浓度会影响切刻内切酶恒温扩增效率,而海藻糖添加与否在本实验中与扩增效率无关.在最优条件下,NEMA恒温扩增方法对于蜡样芽孢杆菌质粒的灵敏度达到1.7 pmol/L.结论 NEMA可以用来进行较长片段的扩增,有望成为一种常规的恒温扩增技术,应用到战时或者应急条件下的快速核酸诊断中.
目的 採用切刻內切酶介導恆溫擴增技術(nicking enzyme mediated isothermal amplification,NEMA)擴增蠟樣芽孢桿菌質粒,攷察緩遲體繫、溫度、離子濃度等條件對擴增效率的影響.方法 通過獨特的引物設計,採用NEMA技術擴增蠟樣芽孢桿菌質粒,通過繫列實驗優化瞭緩遲體繫、溫度和離子濃度等條件,採用瓊脂糖凝膠電泳觀察擴增結果.結果 通過設計不同長度片段的擴增產物,證明採用NEMA技術進行恆溫擴增引物設計的正確性.擴增反應中,緩遲體繫的組成、擴增溫度、體繫鎂離子及二甲基亞砜(DMSO)的濃度會影響切刻內切酶恆溫擴增效率,而海藻糖添加與否在本實驗中與擴增效率無關.在最優條件下,NEMA恆溫擴增方法對于蠟樣芽孢桿菌質粒的靈敏度達到1.7 pmol/L.結論 NEMA可以用來進行較長片段的擴增,有望成為一種常規的恆溫擴增技術,應用到戰時或者應急條件下的快速覈痠診斷中.
목적 채용절각내절매개도항온확증기술(nicking enzyme mediated isothermal amplification,NEMA)확증사양아포간균질립,고찰완충체계、온도、리자농도등조건대확증효솔적영향.방법 통과독특적인물설계,채용NEMA기술확증사양아포간균질립,통과계렬실험우화료완충체계、온도화리자농도등조건,채용경지당응효전영관찰확증결과.결과 통과설계불동장도편단적확증산물,증명채용NEMA기술진행항온확증인물설계적정학성.확증반응중,완충체계적조성、확증온도、체계미리자급이갑기아풍(DMSO)적농도회영향절각내절매항온확증효솔,이해조당첨가여부재본실험중여확증효솔무관.재최우조건하,NEMA항온확증방법대우사양아포간균질립적령민도체도1.7 pmol/L.결론 NEMA가이용래진행교장편단적확증,유망성위일충상규적항온확증기술,응용도전시혹자응급조건하적쾌속핵산진단중.
