农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
4期
685-691
,共7页
程祥%邓捷%孟书燕%来威锋%王华岩
程祥%鄧捷%孟書燕%來威鋒%王華巖
정상%산첩%맹서연%래위봉%왕화암
牛%巨噬细胞天然抗性蛋白1(NRAMP1)%可变剪接%分子克隆%载体构建%组织表达
牛%巨噬細胞天然抗性蛋白1(NRAMP1)%可變剪接%分子剋隆%載體構建%組織錶達
우%거서세포천연항성단백1(NRAMP1)%가변전접%분자극륭%재체구건%조직표체
巨噬细胞天然抗性蛋白1 (NRAMP1)可抑制结核分枝杆菌(Mycobacterium)和布氏杆菌(Brucella)等多种胞内寄生病原菌的感染,提高动物机体的抗病能力.本研究从秦川牛脾脏中克隆了NRA MP1基因的一种可变剪接体NRA MPI-ISO,序列分析表明,NRA MPI-ISO比NRAMP1多了第3个内含子,从而导致编码序列提前终止于第3个内含子,NRA MPI-ISO编码200个氨基酸.为了探索可变剪接体NRAMPI-ISO的表达情况,本研究分别构建了原核表达载体pET-41-NRA MPI-ISO和真核表达载体pEGFP-NRA MPI-ISO.原核表达载体pET-41 -NRA MPI-ISO可在不同浓度的IPTG诱导下在大肠杆菌BL21中高效表达.真核表达载体pEGFP-NRA MPI-ISO转染牛成纤维细胞后,EGFP-NRAMP 1-ISO融合蛋白分布在细胞核和细胞质中,而正常的NRAMP1蛋白只分布在细胞质的溶酶体膜周围.半定量RT-PCR检测表明,NRA MPI-ISO基因在心、脾脏、肺脏等组织有较高的表达,而在脑、胰、生殖嵴中的表达量相对较低.本研究为进一步研究NRA MPI-ISO基因生物学功能提供了重要信息.
巨噬細胞天然抗性蛋白1 (NRAMP1)可抑製結覈分枝桿菌(Mycobacterium)和佈氏桿菌(Brucella)等多種胞內寄生病原菌的感染,提高動物機體的抗病能力.本研究從秦川牛脾髒中剋隆瞭NRA MP1基因的一種可變剪接體NRA MPI-ISO,序列分析錶明,NRA MPI-ISO比NRAMP1多瞭第3箇內含子,從而導緻編碼序列提前終止于第3箇內含子,NRA MPI-ISO編碼200箇氨基痠.為瞭探索可變剪接體NRAMPI-ISO的錶達情況,本研究分彆構建瞭原覈錶達載體pET-41-NRA MPI-ISO和真覈錶達載體pEGFP-NRA MPI-ISO.原覈錶達載體pET-41 -NRA MPI-ISO可在不同濃度的IPTG誘導下在大腸桿菌BL21中高效錶達.真覈錶達載體pEGFP-NRA MPI-ISO轉染牛成纖維細胞後,EGFP-NRAMP 1-ISO融閤蛋白分佈在細胞覈和細胞質中,而正常的NRAMP1蛋白隻分佈在細胞質的溶酶體膜週圍.半定量RT-PCR檢測錶明,NRA MPI-ISO基因在心、脾髒、肺髒等組織有較高的錶達,而在腦、胰、生殖嵴中的錶達量相對較低.本研究為進一步研究NRA MPI-ISO基因生物學功能提供瞭重要信息.
거서세포천연항성단백1 (NRAMP1)가억제결핵분지간균(Mycobacterium)화포씨간균(Brucella)등다충포내기생병원균적감염,제고동물궤체적항병능력.본연구종진천우비장중극륭료NRA MP1기인적일충가변전접체NRA MPI-ISO,서렬분석표명,NRA MPI-ISO비NRAMP1다료제3개내함자,종이도치편마서렬제전종지우제3개내함자,NRA MPI-ISO편마200개안기산.위료탐색가변전접체NRAMPI-ISO적표체정황,본연구분별구건료원핵표체재체pET-41-NRA MPI-ISO화진핵표체재체pEGFP-NRA MPI-ISO.원핵표체재체pET-41 -NRA MPI-ISO가재불동농도적IPTG유도하재대장간균BL21중고효표체.진핵표체재체pEGFP-NRA MPI-ISO전염우성섬유세포후,EGFP-NRAMP 1-ISO융합단백분포재세포핵화세포질중,이정상적NRAMP1단백지분포재세포질적용매체막주위.반정량RT-PCR검측표명,NRA MPI-ISO기인재심、비장、폐장등조직유교고적표체,이재뇌、이、생식척중적표체량상대교저.본연구위진일보연구NRA MPI-ISO기인생물학공능제공료중요신식.
