牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析
우유선염무유련구균Pgk기인항원우세구원핵표체산물적항원성분석
ANTIGENICITY ANALYSIS OF PROKARYOTIC EXPRESSION PRODUCT OF PGK GENE ANTIGENIC DOMINANT REGION OF BOVINE MASTITIS STREPTOCOCCUS AGALACTIAE
  • 万方数据
    中国动物传染病学报 중국동물전염병학보
    CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
    2011年 1期 39-44 ,共6页

    张海宝%布日额%吴金花%王学理%孙立杰%唐吉思%锡林高娃%刘燕%张忠祥

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    무유련구균%Pgk기인%원핵표체%항원성
    为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球茵Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定.结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基.临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因(AE009948)核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序歹同源性为99.69%.将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a (+)中,构建重组表达载体Pgk-pET30a(+),再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白.经Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础.
    위료탐색우유선염무유련구균린산감유산격매(Phosphoglycerate kinase,Pgk)기인편마단백적항원성,근거GenBank공포적우원무유련구인Pgk기인서렬,설계병합성일대인물,통과PCR확증출Pgk단백항원우세구적편마서렬,병대기진행극륭、측서、전화、유도표체급항원성감정.결과현시극륭적Pgk기인서렬함유984 bp,편마328개안기산잔기.림상분리주여GenBank상공포적B군무유련구균균주Pgk기인(AE009948)핵감산서렬동원성위99.09%,안기산서알동원성위99.69%.장확증적Pgk기인편단극륭지원핵표체재체pET30a (+)중,구건중조표체재체Pgk-pET30a(+),재장사선적양성중조질립전화지BL21공정균,경IPTG유도획득부분가용성표체Pgk중조단백.경Ni2+친화층석주순화득도순도재90%이상적단백,경Western blot분석결과표명,중조단백구유량호적항원성,위진일보탐색기대내우적면역원성연구전정료량호적실험기출.
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