生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2011年
2期
107-110
,共4页
雷孝锋%江志钢%李志%王华%万永奇%袁婺洲%吴秀山
雷孝鋒%江誌鋼%李誌%王華%萬永奇%袁婺洲%吳秀山
뢰효봉%강지강%리지%왕화%만영기%원무주%오수산
Wnt11%融合蛋白%斑马鱼%多克隆抗体
Wnt11%融閤蛋白%斑馬魚%多剋隆抗體
Wnt11%융합단백%반마어%다극륭항체
Wnt11为Wnt家族的成员,是参与Wnt信号途径调控的转录因子,对心脏的正常发育起着非常重要的作用.根据已报道的Wnt11基因序列,通过RT-PCR从斑马鱼心脏组织中得到Wnt11部分编码区序列,将其连接到pGEX-4T-1原核表达载体上.经酶切及测序鉴定后,质粒构建成功,将重组质粒(pGEX-4T-Wnt11)转化E.coli BL21,通过IPTG诱导表达出融合蛋白,采用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化.将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Wnt11原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Wnt11多克隆抗体,为Writ11功能的进一步研究奠定了基础.
Wnt11為Wnt傢族的成員,是參與Wnt信號途徑調控的轉錄因子,對心髒的正常髮育起著非常重要的作用.根據已報道的Wnt11基因序列,通過RT-PCR從斑馬魚心髒組織中得到Wnt11部分編碼區序列,將其連接到pGEX-4T-1原覈錶達載體上.經酶切及測序鑒定後,質粒構建成功,將重組質粒(pGEX-4T-Wnt11)轉化E.coli BL21,通過IPTG誘導錶達齣融閤蛋白,採用穀胱甘肽瓊脂糖珠親和純化.將純化的融閤蛋白免疫新西蘭大白兔製備多剋隆抗體,併用Western Blot檢測抗體的效價和特異性.結果顯示,穫得瞭Wnt11原覈錶達重組融閤蛋白及高效價的特異性兔抗Wnt11多剋隆抗體,為Writ11功能的進一步研究奠定瞭基礎.
Wnt11위Wnt가족적성원,시삼여Wnt신호도경조공적전록인자,대심장적정상발육기착비상중요적작용.근거이보도적Wnt11기인서렬,통과RT-PCR종반마어심장조직중득도Wnt11부분편마구서렬,장기련접도pGEX-4T-1원핵표체재체상.경매절급측서감정후,질립구건성공,장중조질립(pGEX-4T-Wnt11)전화E.coli BL21,통과IPTG유도표체출융합단백,채용곡광감태경지당주친화순화.장순화적융합단백면역신서란대백토제비다극륭항체,병용Western Blot검측항체적효개화특이성.결과현시,획득료Wnt11원핵표체중조융합단백급고효개적특이성토항Wnt11다극륭항체,위Writ11공능적진일보연구전정료기출.
