CAJ | 학술논문

本研究构建一种既可高效感染靶细胞又能实现安全定点整合入宿主基因组的腺病毒嵌合栽体.通过一系列DNA操作构建腺病毒-整合酶嵌合系统,该系统包含两个腺病毒载体:一个携带转基因表达框,表达框内有hFⅨ,红色荧光蛋白编码序列以及attB(phiC31识别位点),表达框两侧各有1个loxP(Cre识别位点):另一个腺病毒载体携带Cre和phiC31基因.同时构建只表达Cre和只表达phiC31的载体作为对照载体.在体外分别用脂质体转染293A细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,用RT-PCR鉴定各个基因的表达.结果表明,该腺病毒-整合酶嵌合系统构建成功.体外分别用脂质体转染293A细胞后,可见绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白表达.RT-PCR鉴定表明,该系统能够成功表达各种目的蛋白.结论:成功构建了腺病毒-整合酶嵌合系统,为进一步研究其治疗作用提供良好基础.
본연구구건일충기가고효감염파세포우능실현안전정점정합입숙주기인조적선병독감합재체.통과일계렬DNA조작구건선병독-정합매감합계통,해계통포함량개선병독재체:일개휴대전기인표체광,표체광내유hFⅨ,홍색형광단백편마서렬이급attB(phiC31식별위점),표체광량측각유1개loxP(Cre식별위점):령일개선병독재체휴대Cre화phiC31기인.동시구건지표체Cre화지표체phiC31적재체작위대조재체.재체외분별용지질체전염293A세포,용형광현미경관찰형광단백적표체,용RT-PCR감정각개기인적표체.결과표명,해선병독-정합매감합계통구건성공.체외분별용지질체전염293A세포후,가견록색형광단백화홍색형광단백표체.RT-PCR감정표명,해계통능구성공표체각충목적단백.결론:성공구건료선병독-정합매감합계통,위진일보연구기치료작용제공량호기출.