生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2010年
3期
187-192,封2
,共7页
朱章华%仇毓东%施晓雷%谢婷%丁义涛
硃章華%仇毓東%施曉雷%謝婷%丁義濤
주장화%구육동%시효뢰%사정%정의도
生物人工肝%干细胞%体外诱导%肝细胞
生物人工肝%榦細胞%體外誘導%肝細胞
생물인공간%간세포%체외유도%간세포
目的 寻找人骨髓间充质干细胞(hBMSC)扩增并向肝细胞方向诱导分化的培养体系,并验证该体系的诱导效率.方法 健康成人志愿者骨髓,经密度梯度离心分离人骨髓单个核细胞(hBMMNC),采用含表皮生长因子(EGF)和血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)的培养液进行扩增培养至1010数量级后,以含肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维样细胞生长因子4(FGF-4)、制瘤素(OSM)质量浓度各20 ng/mL的培养液进行诱导培养,以RT-PCR、酶联免疫吸附分析(ELISA)、流式细胞分析、生物化学检测等方法检测其白蛋白、CK18、甲胎蛋白、尿素等的合成能力及氨代谢能力.结果 培养液扩增hBMSC至1010数量级平均需(22.1 ± 2.2) d,扩增后细胞表型特征仍符合hBMSC特征.扩增后的细胞经上述诱导体系诱导后,6 d出现甲胎蛋白的合成,9 ～ 12 d出现白蛋白的合成,18 d达到高峰;对氨的代谢和尿素的合成功能在9 ～ 12 d出现并持续存在.结论 以含EGF和PDGF-BB的培养液扩增hBMSC快速,并能很好地保持干细胞的表型特征和诱导潜能.以含HGF、FGF-4、OSM质量浓度各20 ng/mL的诱导培养体系,能成功地诱导经扩增后的hBMSC向肝细胞方向转化.
目的 尋找人骨髓間充質榦細胞(hBMSC)擴增併嚮肝細胞方嚮誘導分化的培養體繫,併驗證該體繫的誘導效率.方法 健康成人誌願者骨髓,經密度梯度離心分離人骨髓單箇覈細胞(hBMMNC),採用含錶皮生長因子(EGF)和血小闆衍生生長因子-BB(PDGF-BB)的培養液進行擴增培養至1010數量級後,以含肝細胞生長因子(HGF)、堿性成纖維樣細胞生長因子4(FGF-4)、製瘤素(OSM)質量濃度各20 ng/mL的培養液進行誘導培養,以RT-PCR、酶聯免疫吸附分析(ELISA)、流式細胞分析、生物化學檢測等方法檢測其白蛋白、CK18、甲胎蛋白、尿素等的閤成能力及氨代謝能力.結果 培養液擴增hBMSC至1010數量級平均需(22.1 ± 2.2) d,擴增後細胞錶型特徵仍符閤hBMSC特徵.擴增後的細胞經上述誘導體繫誘導後,6 d齣現甲胎蛋白的閤成,9 ～ 12 d齣現白蛋白的閤成,18 d達到高峰;對氨的代謝和尿素的閤成功能在9 ～ 12 d齣現併持續存在.結論 以含EGF和PDGF-BB的培養液擴增hBMSC快速,併能很好地保持榦細胞的錶型特徵和誘導潛能.以含HGF、FGF-4、OSM質量濃度各20 ng/mL的誘導培養體繫,能成功地誘導經擴增後的hBMSC嚮肝細胞方嚮轉化.
목적 심조인골수간충질간세포(hBMSC)확증병향간세포방향유도분화적배양체계,병험증해체계적유도효솔.방법 건강성인지원자골수,경밀도제도리심분리인골수단개핵세포(hBMMNC),채용함표피생장인자(EGF)화혈소판연생생장인자-BB(PDGF-BB)적배양액진행확증배양지1010수량급후,이함간세포생장인자(HGF)、감성성섬유양세포생장인자4(FGF-4)、제류소(OSM)질량농도각20 ng/mL적배양액진행유도배양,이RT-PCR、매련면역흡부분석(ELISA)、류식세포분석、생물화학검측등방법검측기백단백、CK18、갑태단백、뇨소등적합성능력급안대사능력.결과 배양액확증hBMSC지1010수량급평균수(22.1 ± 2.2) d,확증후세포표형특정잉부합hBMSC특정.확증후적세포경상술유도체계유도후,6 d출현갑태단백적합성,9 ～ 12 d출현백단백적합성,18 d체도고봉;대안적대사화뇨소적합성공능재9 ～ 12 d출현병지속존재.결론 이함EGF화PDGF-BB적배양액확증hBMSC쾌속,병능흔호지보지간세포적표형특정화유도잠능.이함HGF、FGF-4、OSM질량농도각20 ng/mL적유도배양체계,능성공지유도경확증후적hBMSC향간세포방향전화.
