黑龙江科技信息
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흑룡강과기신식
HEILONGJIANG SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION
2010年
10期
127,285
,共2页
李聪颖%许应天%张西臣%方东山
李聰穎%許應天%張西臣%方東山
리총영%허응천%장서신%방동산
弓形虫%表面抗原基因%大肠杆菌表达
弓形蟲%錶麵抗原基因%大腸桿菌錶達
궁형충%표면항원기인%대장간균표체
目的:扩增弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,在大肠杆菌中表达.方法:设计并合成引物,经PCR法扩增SAG2基因序列,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-SAG2质粒,经酶切鉴定、测序,与pGEX-4T-1载体连接,构建pGEX-4T-1-SAG2质粒.将重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,进行SDS-PAGE和Westem-blot鉴定.结果:扩增出约561 bp的SAG2基因序列,成功构建pGEX-4T-1-SAG2质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白的表达量占茵体总蛋白的40%.SDS-PAGE电泳显示pGEX-4T-1-SAG2的融合蛋白的分子量约为45 kd.Western-blot显示融合蛋白有良好的抗原性.结论表达质粒在大肠杆菌中得到高效表达,为进一步研究弓形虫病的诊断做好准备.
目的:擴增弓形蟲SAG2基因,構建pGEX-4T-1-SAG2重組質粒,在大腸桿菌中錶達.方法:設計併閤成引物,經PCR法擴增SAG2基因序列,與pMD18-T載體連接,構建pMD18-T-SAG2質粒,經酶切鑒定、測序,與pGEX-4T-1載體連接,構建pGEX-4T-1-SAG2質粒.將重組質粒轉入大腸桿菌誘導錶達,進行SDS-PAGE和Westem-blot鑒定.結果:擴增齣約561 bp的SAG2基因序列,成功構建pGEX-4T-1-SAG2質粒,併在大腸桿菌中得到高效錶達,融閤蛋白的錶達量佔茵體總蛋白的40%.SDS-PAGE電泳顯示pGEX-4T-1-SAG2的融閤蛋白的分子量約為45 kd.Western-blot顯示融閤蛋白有良好的抗原性.結論錶達質粒在大腸桿菌中得到高效錶達,為進一步研究弓形蟲病的診斷做好準備.
목적:확증궁형충SAG2기인,구건pGEX-4T-1-SAG2중조질립,재대장간균중표체.방법:설계병합성인물,경PCR법확증SAG2기인서렬,여pMD18-T재체련접,구건pMD18-T-SAG2질립,경매절감정、측서,여pGEX-4T-1재체련접,구건pGEX-4T-1-SAG2질립.장중조질립전입대장간균유도표체,진행SDS-PAGE화Westem-blot감정.결과:확증출약561 bp적SAG2기인서렬,성공구건pGEX-4T-1-SAG2질립,병재대장간균중득도고효표체,융합단백적표체량점인체총단백적40%.SDS-PAGE전영현시pGEX-4T-1-SAG2적융합단백적분자량약위45 kd.Western-blot현시융합단백유량호적항원성.결론표체질립재대장간균중득도고효표체,위진일보연구궁형충병적진단주호준비.
