南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
5期
902-905
,共4页
梁继珍%李荣%张军一%郑航%罗荣城
樑繼珍%李榮%張軍一%鄭航%囉榮城
량계진%리영%장군일%정항%라영성
SHp-1%酪氨酸磷酸酶%乳腺肿瘤%基因重组%逆转录病毒
SHp-1%酪氨痠燐痠酶%乳腺腫瘤%基因重組%逆轉錄病毒
SHp-1%락안산린산매%유선종류%기인중조%역전록병독
目的 构建逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1.获取重组逆转录病毒.并将SHP-1基因转导入乳腺癌MDA-MB-231细胞株.方法 采用RT-PCR方法从高表达SHP-1的人乳腺癌细胞株MCF-7中克隆出SHP-1基因全长cDNA,构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,通过脂质体介导将其转染入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231.采用Western blotting方法检测SHP-1基因在MDA-MB-231细胞中的表达情况.结果 成功构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,转染包装细胞PT67,筛选出对G418具有稳定抗性的克隆PT67/SHP-1,获取重组逆转录病毒上清液,并感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231.从蛋白水平证实,感染后的MDA-MB-231有SHP-1基因的表达.结论 将SHP-1基因定向克隆入逆转录病毒载体的方法可成功获取重组逆转录病毒,感染MDA-MB-231细胞得到稳定表达SHP-1基因MDA-MB-231/SHP-1,为进一步研究奠定了基础.
目的 構建逆轉錄病毒錶達載體pLNCX2-SHP-1.穫取重組逆轉錄病毒.併將SHP-1基因轉導入乳腺癌MDA-MB-231細胞株.方法 採用RT-PCR方法從高錶達SHP-1的人乳腺癌細胞株MCF-7中剋隆齣SHP-1基因全長cDNA,構建重組逆轉錄病毒錶達載體pLNCX2-SHP-1,通過脂質體介導將其轉染入包裝細胞繫PT67,G418篩選建立穩定產病毒的細胞株,將病毒感染人乳腺癌細胞MDA-MB-231.採用Western blotting方法檢測SHP-1基因在MDA-MB-231細胞中的錶達情況.結果 成功構建重組逆轉錄病毒錶達載體pLNCX2-SHP-1,轉染包裝細胞PT67,篩選齣對G418具有穩定抗性的剋隆PT67/SHP-1,穫取重組逆轉錄病毒上清液,併感染人乳腺癌細胞MDA-MB-231.從蛋白水平證實,感染後的MDA-MB-231有SHP-1基因的錶達.結論 將SHP-1基因定嚮剋隆入逆轉錄病毒載體的方法可成功穫取重組逆轉錄病毒,感染MDA-MB-231細胞得到穩定錶達SHP-1基因MDA-MB-231/SHP-1,為進一步研究奠定瞭基礎.
목적 구건역전록병독표체재체pLNCX2-SHP-1.획취중조역전록병독.병장SHP-1기인전도입유선암MDA-MB-231세포주.방법 채용RT-PCR방법종고표체SHP-1적인유선암세포주MCF-7중극륭출SHP-1기인전장cDNA,구건중조역전록병독표체재체pLNCX2-SHP-1,통과지질체개도장기전염입포장세포계PT67,G418사선건립은정산병독적세포주,장병독감염인유선암세포MDA-MB-231.채용Western blotting방법검측SHP-1기인재MDA-MB-231세포중적표체정황.결과 성공구건중조역전록병독표체재체pLNCX2-SHP-1,전염포장세포PT67,사선출대G418구유은정항성적극륭PT67/SHP-1,획취중조역전록병독상청액,병감염인유선암세포MDA-MB-231.종단백수평증실,감염후적MDA-MB-231유SHP-1기인적표체.결론 장SHP-1기인정향극륭입역전록병독재체적방법가성공획취중조역전록병독,감염MDA-MB-231세포득도은정표체SHP-1기인MDA-MB-231/SHP-1,위진일보연구전정료기출.
