CAJ | 학술논문

目的:探讨抗人死亡受体5(DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞诱导凋亡的Caspase分子机制.方法:琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6作用后Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞生长抑制作用的剂量.效果关系;Annexin V-FTTC/PI双染流式细胞术定量分析mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用;观察Caspase-10、9、8、3等抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspaw-10、9、8、3、Bid(tbid)、Cyto c等活化裂解的情况.结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的生长抑制作用且呈量-效关系,Annexin V-FTTC/PI双染流式细胞术检测显示,mDRA-6在2.0 μg/ml浓度作用Jurkat细胞0.23、0.5、1、2小时,其凋亡率分别为16.17%、28.25%、69.23%、78.23%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA.6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.85%,Caspase-3和Cas-pase-9抑制剂的抑制率分别为54.20%、8.74%,而Caspase-lO的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、3、9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,Bid激活降解为tbid,Cyto c大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现.结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是激活了死亡受体信号传导途径上游的Caspase-8引起的,该细胞凋亡机制涉及Caspase-3、Caspase-9及Bid(tbid)、Cyto c等分子,而同样是凋亡的上游信号Caspase-10没有参与此凋亡过程.本研究为mDRA-6的人源化改造及后续的实验研究打下了基础.
목적:탐토항인사망수체5(DR5)공능성단극륭항체(mDRA-6)대Jurkat세포유도조망적Caspase분자궤제.방법:경지당응효전영검측mDRA-6작용후Jurkat세포적DNA ladder;MTT법검측단극륭항체(mDRA-6)대Jurkat세포생장억제작용적제량.효과관계;Annexin V-FTTC/PI쌍염류식세포술정량분석mDRA-6대Jurkat세포적조망작용;관찰Caspase-10、9、8、3등억제제대mDRA-6유도세포조망적억제작용;면역인적기술검측조망신호단백Caspaw-10、9、8、3、Bid(tbid)、Cyto c등활화렬해적정황.결과:경지당응효전영현시DNA정현명현제상대형;mDRA-6대Jurkat세포구유명현적생장억제작용차정량-효관계,Annexin V-FTTC/PI쌍염류식세포술검측현시,mDRA-6재2.0 μg/ml농도작용Jurkat세포0.23、0.5、1、2소시,기조망솔분별위16.17%、28.25%、69.23%、78.23%;Caspase-8억제제능명현억제mDRA.6유도적세포조망,억제솔위77.85%,Caspase-3화Cas-pase-9억제제적억제솔분별위54.20%、8.74%,이Caspase-lO적억제제무억제작용;면역인적기술검측현시Caspase-8、3、9균정현수시간연장매원축점감소、활화편단증가적현상,Bid격활강해위tbid,Cyto c대량석방,이Caspase-10매원무명현개변、무활화편단출현.결론:mDRA-6유도Jurkat세포조망주요시격활료사망수체신호전도도경상유적Caspase-8인기적,해세포조망궤제섭급Caspase-3、Caspase-9급Bid(tbid)、Cyto c등분자,이동양시조망적상유신호Caspase-10몰유삼여차조망과정.본연구위mDRA-6적인원화개조급후속적실험연구타하료기출.