中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
11期
951-953
,共3页
张竞%龚伟%梅兴国%阎浩林
張競%龔偉%梅興國%閻浩林
장경%공위%매흥국%염호림
呼吸道合胞病毒%G蛋白%CTL表位%穿膜肽%融合蛋白%表达%纯化
呼吸道閤胞病毒%G蛋白%CTL錶位%穿膜肽%融閤蛋白%錶達%純化
호흡도합포병독%G단백%CTL표위%천막태%융합단백%표체%순화
目的 在大肠杆菌中表达含穿膜肽HIV-TAT与呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白片段G1及CTL表位的融合蛋白,并进行纯化.方法 以质粒pET-G1F/M2为模板,扩增含TAT、RSV G蛋白片段G1和CTL表位F/M2的融合基因片段,与原核表达质粒pET-His连接,构建融合表达质粒pET-TAT-G1F/M2,转化E coli BL21(DE3)plysS进行诱导表达,采用Ni2+螯合亲和层析法纯化经尿素变性的包涵体,梯度透析复性纯化的目的 蛋白,并进行Western blot鉴定.结果 在E coli中可高效表达重组蛋白TAT-G1F/M2,表达量占菌体总蛋白的30%以上,目的 蛋白主要存在于包涵体中.经变性、纯化、复性可获得高纯度(>95%)特异性的TAT-G1F/M2蛋白.结论 已在大肠杆菌中成功表达了融合蛋白TAT-G1F/M2,为进一步进行RSV体内体外免疫学研究奠定了基础.
目的 在大腸桿菌中錶達含穿膜肽HIV-TAT與呼吸道閤胞病毒(RSV)G蛋白片段G1及CTL錶位的融閤蛋白,併進行純化.方法 以質粒pET-G1F/M2為模闆,擴增含TAT、RSV G蛋白片段G1和CTL錶位F/M2的融閤基因片段,與原覈錶達質粒pET-His連接,構建融閤錶達質粒pET-TAT-G1F/M2,轉化E coli BL21(DE3)plysS進行誘導錶達,採用Ni2+螯閤親和層析法純化經尿素變性的包涵體,梯度透析複性純化的目的 蛋白,併進行Western blot鑒定.結果 在E coli中可高效錶達重組蛋白TAT-G1F/M2,錶達量佔菌體總蛋白的30%以上,目的 蛋白主要存在于包涵體中.經變性、純化、複性可穫得高純度(>95%)特異性的TAT-G1F/M2蛋白.結論 已在大腸桿菌中成功錶達瞭融閤蛋白TAT-G1F/M2,為進一步進行RSV體內體外免疫學研究奠定瞭基礎.
목적 재대장간균중표체함천막태HIV-TAT여호흡도합포병독(RSV)G단백편단G1급CTL표위적융합단백,병진행순화.방법 이질립pET-G1F/M2위모판,확증함TAT、RSV G단백편단G1화CTL표위F/M2적융합기인편단,여원핵표체질립pET-His련접,구건융합표체질립pET-TAT-G1F/M2,전화E coli BL21(DE3)plysS진행유도표체,채용Ni2+오합친화층석법순화경뇨소변성적포함체,제도투석복성순화적목적 단백,병진행Western blot감정.결과 재E coli중가고효표체중조단백TAT-G1F/M2,표체량점균체총단백적30%이상,목적 단백주요존재우포함체중.경변성、순화、복성가획득고순도(>95%)특이성적TAT-G1F/M2단백.결론 이재대장간균중성공표체료융합단백TAT-G1F/M2,위진일보진행RSV체내체외면역학연구전정료기출.
