卒中与神经疾病
卒中與神經疾病
졸중여신경질병
2008年
5期
264-267
,共4页
余樱%任庆国%解翠红%王伟
餘櫻%任慶國%解翠紅%王偉
여앵%임경국%해취홍%왕위
流式细胞仪%荧光激活细胞分类术%thy1-GFP-J转基因小鼠%神经元
流式細胞儀%熒光激活細胞分類術%thy1-GFP-J轉基因小鼠%神經元
류식세포의%형광격활세포분류술%thy1-GFP-J전기인소서%신경원
目的 获得活体哺乳动物脑内单一纯化的神经元群.方法 用RT-PCR和激光共聚焦显微镜扫描脑片鉴定thy1-GFP-J转基因小鼠,取2月龄鉴定阳性小鼠皮层和海马组织.应用番木瓜蛋白酶分离系统制备脑组织单细胞悬液.PI标记死亡细胞,流式细胞仪荧光激活细胞分类技术(FACS)分选收集GFP+和PI的存活神经元,并抽提获得细胞的RNA和蛋白.结果 阳性转基因小鼠DNA的PCR扩增鉴定显示为内参(324bp)和所转基因(173bp)两条带,脑片的激光共聚焦扫描结果显示海马和皮层均可见大小较均一的圆点状绿色荧光.经FACS分选后的细胞几乎全都发出绿色荧光,每次产量约为0.5～1×106个存活神经元.获得的纯化神经元中抽提的RNA和蛋白可用于RT-PCR和western blot检测.结论 利用FACS可以从thy1-GFP-J转基因小鼠脑内获得单一纯化的存活神经元群.该技术的应用将为活体神经元细胞特异性的基因表达和蛋白定量分析研究提供一个可行方案.
目的 穫得活體哺乳動物腦內單一純化的神經元群.方法 用RT-PCR和激光共聚焦顯微鏡掃描腦片鑒定thy1-GFP-J轉基因小鼠,取2月齡鑒定暘性小鼠皮層和海馬組織.應用番木瓜蛋白酶分離繫統製備腦組織單細胞懸液.PI標記死亡細胞,流式細胞儀熒光激活細胞分類技術(FACS)分選收集GFP+和PI的存活神經元,併抽提穫得細胞的RNA和蛋白.結果 暘性轉基因小鼠DNA的PCR擴增鑒定顯示為內參(324bp)和所轉基因(173bp)兩條帶,腦片的激光共聚焦掃描結果顯示海馬和皮層均可見大小較均一的圓點狀綠色熒光.經FACS分選後的細胞幾乎全都髮齣綠色熒光,每次產量約為0.5～1×106箇存活神經元.穫得的純化神經元中抽提的RNA和蛋白可用于RT-PCR和western blot檢測.結論 利用FACS可以從thy1-GFP-J轉基因小鼠腦內穫得單一純化的存活神經元群.該技術的應用將為活體神經元細胞特異性的基因錶達和蛋白定量分析研究提供一箇可行方案.
목적 획득활체포유동물뇌내단일순화적신경원군.방법 용RT-PCR화격광공취초현미경소묘뇌편감정thy1-GFP-J전기인소서,취2월령감정양성소서피층화해마조직.응용번목과단백매분리계통제비뇌조직단세포현액.PI표기사망세포,류식세포의형광격활세포분류기술(FACS)분선수집GFP+화PI적존활신경원,병추제획득세포적RNA화단백.결과 양성전기인소서DNA적PCR확증감정현시위내삼(324bp)화소전기인(173bp)량조대,뇌편적격광공취초소묘결과현시해마화피층균가견대소교균일적원점상록색형광.경FACS분선후적세포궤호전도발출록색형광,매차산량약위0.5～1×106개존활신경원.획득적순화신경원중추제적RNA화단백가용우RT-PCR화western blot검측.결론 이용FACS가이종thy1-GFP-J전기인소서뇌내획득단일순화적존활신경원군.해기술적응용장위활체신경원세포특이성적기인표체화단백정량분석연구제공일개가행방안.
